Рыба аргентина полезные свойства: Рыба аргентина полезные свойства и противопоказания

готовили, как описано ранее (He et al., 2017). LGG (ATCC 53103) был любезно предоставлен профессором Sheng-He Huang (Детская больница Лос-Анджелеса, Университет Южной Калифорнии) и размножался микроаэрофильно в бульоне Де Ман, Рогоза и Шарпа (MRS) (Guangdong Huankai Microbial Science and Technology Co.Ltd., Гуанчжоу, Китай) при 37 ° C. LGG инкубировали в 5 мл бульона MRS при температуре 37 ° C в течение 18 ч в микроаэрофильных условиях в течение трех поколений перед приготовлением LCS. После этого LGG инокулировали полосами на агар MRS и инкубировали при 37 ° C в течение 36 часов в микроаэрофильных условиях. Отдельную колонию отбирали кончиком микропипетки, добавляли в коническую колбу с 300 мл бульона MRS и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов в микроаэрофильных условиях. Затем культуральный супернатант собирали и концентрировали с помощью устройства для ультрафильтрации (Merck Millipore) с отсечкой мол. Массы 3000 дальтон.Для предварительного определения характеристик биоактивной молекулы в культуральном супернатанте LCS предварительно обрабатывали протеиназой K, карбогидразой или ДНКазой в соответствии со следующим процессом (Harb et al., 2013): (1) обработка протеиназой K: 1 мл LCS расщепляли с помощью 10 мкл протеиназы К (52 Ед / мг, Solarbio, Пекин, Китай) в течение 10 мин при 37 ° C. Затем добавляли 20 мкл ингибитора протеиназы. (2) Обработка ДНКазой: 1 мл LCS расщепляли 10 мкл ДНКазы (Tiangen Biotech Co., Ltd., Пекин, Китай) в течение 25 минут при 37 ° C.Затем добавляли 10 мкл инактиватора ДНКазы. (3) Обработка β-глюкозидазой и целлюлазой: 1 мл LCS расщепляли 10 мкл β-глюкозидазы и 10 мкл целлюлазы (Sigma-Aldrich, Германия) в течение 4 ч при 50 ° C. Все продукты переваривания собирали и использовали в эксперименте, стимулирующем муцин, как описано ниже.

Анализ ЖХ / МС-МС

LGG осаждали с использованием трихлоруксусной кислоты и разделяли с помощью SDS-PAGE. Затем полосу образца белка из LCS вырезали и обрабатывали для расщепления в геле трипсином для секвенирования (Promega; Pharmacia Biotech), как описано ранее (Katayama et al., 2001). После этого высушенные образцы ресуспендировали в 5% ацетонитриле и 0,1% муравьиной кислоте в воде для анализа методом ЖХ-МС / МС. ЖХ / МС-МС выполняли с расщепленными пептидами на колонке ChromXP C18 (75 мкм × 15 см, C18, 3 мкм 120 Å) с распылительным наконечником. Сбор данных осуществляли с помощью системы Triple TOF 5600 (AB SCIEX, США), оснащенной источником Nanospray III (AB SCIEX, США) и вытянутым кварцевым наконечником в качестве эмиттера (New Objectives, США).

Получение и очистка рекомбинантного белка HM0539 с меткой His

Вкратце, геномная ДНК LGG была выделена и использована в качестве матрицы для ПЦР.Учитывая трансмембранную структуру на N-конце HM0539, праймеры, нацеленные на 51-357 аминокислотные последовательности, были разработаны для амплификации фрагмента внеклеточного белка:

F: 5′-GTAGAATTCGTTAACGCGGCAACGAAAG

R: 5′-CGGGCCTCGAGTTAGTTGATCACTTCAA.

продуктов ПЦР очищали с использованием набора GenElute ^TM PCR Clean-Up Kit (Sigma-Aldrich), а затем расщепляли EcoR I и Xho I с последующим лигированием к тем же сайтам расщепления рестрикционным ферментом pET-31a. (+) (Новаген).Рекомбинантной плазмидой трансформировали E. coli DH5α (Tiangen Biotech Co., Ltd., Пекин, Китай). После инкубации колонии устойчивых к канамицину бактерий лизировали для ПЦР-анализа. Экспрессионная плазмида, продуцирующая HM0539, была подтверждена секвенированием ДНК и трансформирована в E. coli BL21 (DE3) (Tiangen Biotech Co., Ltd., Пекин, Китай). Рекомбинантный белок HM0539 с гистидиновой меткой был сверхэкспрессирован посредством индукции 0,5 мМ изопропил-β- D -тиогалактозида при 37 ° C и очищен с использованием набора для очистки белков с гистидиновыми метками (растворимый белок, CW0894, CWBioTech, Пекин, Китай), согласно данным инструкции производителя.Потенциальный эндотоксин HM0539 был удален с использованием смолы в соответствии с инструкциями поставщика (смола EndotoxinOUT; Sangon Biotech, Шанхай, Китай).

Культура клеток и методы лечения

Линия эпителиальных клеток кишечника Caco-2 была получена из Шанхайского института клеточной биологии (Шанхай, Китай) и выращена при 37 ° C и 5% CO. ₂ в минимальной необходимой среде Игла, содержащей 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FBS). , PAN Biotech, Aidenbach, Германия), пенициллин (100 единиц / мл, HyClone, США) и стрептомицин (100 мкг / мл, HyClone, США).Чтобы позволить Caco-2 полностью дифференцироваться, клетки выращивали в течение минимум 12 дней (Wang et al., 2011). Чтобы выявить положительный эффект HM0539, мы засевали Caco-2 в 24-луночные планшеты для периодического окрашивания по Шиффу (PAS), иммунофлуоресцентного анализа и определения трансэпителиального электрического сопротивления (TEER); и 6-луночные планшеты для вестерн-блоттинга. Дифференцированный Caco-2 инкубировали с разными концентрациями бычьего сывороточного альбумина (контроль, 50 нг / мл) или HM0539 (50 нг / мл) в течение 12 часов. После этого монослои Caco-2 стимулировали фактором некроза опухоли-α (TNF-α, 10 нг / мл, Sigma-Aldrich) или липополисахаридом (LPS, 1 мкг / мл, Sigma-Aldrich).После 6-часовой стимуляции монослои Caco-2 наносили для окрашивания PAS, как описано ниже. Экспрессию ZO-1, окклюдина и MUC2 определяли с помощью вестерн-блоттинга или иммунофлуоресцентного окрашивания.

Анализ PAS

Для колориметрического метода обработанные монослои Caco-2 собирали, лизировали в буфере для лизиса для анализа радиоиммунопреципитации и обрабатывали, как описано ранее (Wang et al., 2014). Клеточный лизис собирали и центрифугировали при 12000 g в течение 10 минут при 4 ° C.Собирали растворимые ингредиенты в супернатанте и определяли содержание белка с помощью набора для анализа бицинхониновой кислоты (Beyotime Institute of Biotechnology, Китай). После этого 50 мкг белка смешивали с 0,1% периодной кислотой в 96-луночном микротитровальном планшете и инкубировали в течение 2 ч при 37 ° C с последующим добавлением равного объема реагента Шиффа в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Производство муцина контролировали при 550 нм с помощью считывающего устройства для микропланшетов. Все образцы анализировали в трех экземплярах.

Для обнаружения муцина, покрывающего монослои Caco-2, обработанные клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 10 мин при комнатной температуре.После этого следовало несколько раз промывать дистиллированной водой и окрашивать с использованием набора для окрашивания PAS (Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Пекин, Китай) в соответствии с инструкциями производителя. После этого все монослои Caco-2 контрастировали гематоксилином и визуализировали с помощью световой микроскопии.

Вестерн-блоттинг для измерения экспрессии белка

Клетки лизировали непосредственно 200 мкл загрузочного буфера 1 × SDS-PAGE. Лизаты клеток разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на поливинилидендифторидные мембраны (размер пор 0,01 мкм).45 мкм, Millipore, США). Затем мембраны блокировали 5% (мас. / Об.) Обезжиренным молоком в буфере TBST [50 мМ Трис / HCl, pH 7,4–7,6, 150 мМ NaCl и 0,1% (об. / Об.) Твин-20] на 1 ч, с последующей инкубацией в первичных антителах, разведенных в 5% обезжиренном молоке в TBS-Tween-20 (TBST), в течение 12 ч при 4 ° C. После этого мембраны промывали и зондировали соответствующим вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (HRP), разведенным в 5% обезжиренном молоке-TBST в течение 1 часа. Экспрессию антигена визуализировали с помощью реагента с усиленной хемилюминесценцией (Pierce Biotechnology, Рокфорд, Иллинойс, США).Используемые первичные антитела следующие: кроличьи анти-MUC2 (1: 1000), кроличьи анти-ZO-1 (1: 2000), кроличьи анти-окклюдин (1: 1000) и кроличьи анти-β-актин (1: 10000). ) (Proteintech Group, Чикаго, Иллинойс, США).

Измерение TEER

Клетки Caco-2 высевали в 24-луночные вставки Transwell (размер пор 3 мкм, диаметр 6,5 мм, Corning Costar Corp., США) и культивировали в течение 19–21 дней. Питательную среду заменяли каждые 2 дня. Целостность монослоев Caco-2 оценивали путем измерения TEER (EVOMAX, World Precision Instruments, США).Чтобы исследовать защитный эффект HM0539 против TNF-α или LPS-индуцированного нарушения целостности кишечника, монослои Caco-2 предварительно обрабатывали 50 нг / мл HM0539 в течение 12 часов, после чего добавляли TNF-α (10 нг / мл) или ЛПС (1 мкг / мл). Значения TEER определялись через 0, 1, 2, 3, 4 и 5 ч после обработки TNF-α или LPS. Эксперименты проводили в трех повторностях.

Система доставки лекарственного средства пектин / зеин-гидрогель

Для доставки HM0539 в толстую кишку использовали систему доставки пектин / зеиновых шариков, поскольку они защищают HM0539 от атаки протеазы.Гранулы пектина / зеина получали, как описано ранее (Shen et al., 2018). Сначала 1% (мас. / Об.) Зеин (Sigma-Aldrich, США) растворяли в 85% -ном растворе этилового спирта (добавляя 0,5% CaCl ₂ , мас. / Об.) Для приготовления раствора зеина. Между тем, HM0539 с меткой His добавляли к 6% раствору пектина (вес / объем, растворять в дистиллированной воде) для приготовления раствора пектин / HM0539. После этого при комнатной температуре раствор пектина / HM0539 вдыхали в шприц с иглой 23G и осторожно капали (приблизительно 50 мкл / капля) в раствор зеина.Гранулы собирали после затвердевания в растворе зеина, промывали несколько раз дистиллированной водой, сушили на воздухе при комнатной температуре и хранили при 4 ° C. Гранулы пектина / зеина без HM0539 получали одновременно в качестве контролей. Согласно предыдущему исследованию (Yan et al., 2011), шарики со средним размером 2 мм содержали 5 мкг белка.

Модель E. coli Заражение K1 пероральным путем

Escherichia coli Инфекция K1 пероральным путем у новорожденных крыс была индуцирована, как описано в нашем предыдущем исследовании (He et al., 2017). Двенадцать неонатальных крыс объемом 2–3 л были объединены и случайным образом разделены на две группы ( n = 6). Чтобы исследовать влияние HM0539 на созревание защиты кишечника новорожденных, новорожденным крысам вводили через желудочный зонд контрольный пектин / зеин или гранулы пектина / зеина, содержащие HM0539, один раз в день в течение 3 дней без инфекции E. coli K1. Всех крыс умерщвляли через 3 дня лечения. Экспрессию маркера пролиферации эпителиальных клеток кишечника Ki67 и маркера дифференцировки MUC2, а также муцина и ZO-1 определяли с помощью иммуногистохимического анализа и анализа PAS.Чтобы исследовать, может ли HM0539 повышать устойчивость новорожденных крыс к оральной инфекции E. coli K1, животным вводили через желудочный зонд контрольный пектин / зеин или гранулы пектина / зеина, содержащие HM0539, один раз в день в течение 3 дней. После этого всем крысам вводили через зонд E. coli K1 (100 мкл, 5 × 10 ⁹ колониеобразующих единиц, КОЕ). Через шестьдесят часов после обработки E. coli K1 всех крыс анестезировали кетамином и лидокаином. Образцы крови и спинномозговой жидкости (CSF) собирали в асептических условиях и высевали на агар для инфузии мозга и сердца с рифампицином (100 мкг / мл) для подсчета бактерий.Для оценки кишечной проницаемости крысы получали флуоресцеинизотиоцианат (FITC) -декстран (Sigma-Aldrich, MW 4000, 60 мг / кг веса тела) перорально за 4 часа до умерщвления. Плазму собирали и интенсивность флуоресценции FITC измеряли с использованием флуоресцентного спектрофотометра (длина волны возбуждения = 485 нм, длина волны излучения = 535 нм).

Декстрансульфат натрия (DSS) — Модель колита и лечение

Двадцать четыре мыши C57BL / 6 (возраст 8–10 недель, 24–28 г) были случайным образом разделены на три группы ( n = 8): контрольная группа, группа DSS-колита и группа HM0539 + DSS- группа колитов.В день 1 контрольная группа и группа с DSS-колитом получали через желудочный зонд контрольный пектин / зеин один раз в день в течение 9 дней, тогда как группы HM0539 + DSS получали через желудочный зонд пектин / зеин, содержащий HM0539. С 3 по 9 день питьевую воду в группе DSS-колита и HM0539 + DSS-колита заменили на 3% DSS (вес / объем, 40 кДа; Aladdin, Шанхай, Китай) в воде, тогда как контрольной группе вводили с обычной питьевой водой. Затем всем мышам давали обычную питьевую воду в течение 2 дней. Во время лечения DSS изменение массы тела регистрировалось ежедневно.На 12 день всех мышей умерщвляли, вырезали их толстую кишку и измеряли длину. Ткани толстой кишки гомогенизировали и лизировали для вестерн-блоттинга для определения экспрессии MUC2 и ZO-1. Некоторые ткани толстой кишки фиксировали формалином при комнатной температуре и заливали для окрашивания гематоксилин-эозином (HE) и иммуногистохимического анализа.

Модель LPS- D -галактозамин (LPS / GalN) и лечение

Двадцать одна мышь C57BL / 6 (возраст 8–10 недель, 24–28 г) была случайным образом разделена на три группы ( n = 7) с различным лечением следующим образом: контрольная группа, группа LPS / GalN и HM0539 + LPS. / Группа ГалН.С 1 по 7 дни и контрольная группа, и группа LPS / GalN получали через желудочный зонд контроль пектина / зеина один раз в день в течение 7 дней, тогда как группу HM0539 + LPS / GalN кормили через желудочный зонд пектином / зеином, содержащим HM0539. На 8 день всем мышам, кроме контрольной группы, внутрибрюшинно вводили ЛПС (40 мкг / кг, из E. coli O55: B5, Sigma-Aldrich, США) и D -галактозамин (360 мг / кг. , Aladdin, Шанхай, Китай), тогда как контрольной группе внутрибрюшинно вводили равный объем физиологического раствора.Для изучения транслокации бактерий через кишечный барьер всех мышей умерщвляли через 24 часа, их печень и брыжеечные лимфатические узлы (MLN) собирали в асептических условиях и гомогенизировали и помещали в пластину на агаре для инфузии сердца и мозга. Все планшеты инкубировали в анаэробных условиях в течение 48 ч при 37 ° C. Для оценки кишечной проницаемости мыши перорально получали FITC-декстран (Sigma-Aldrich, MW 4000, 60 мг / кг массы тела) за 4 часа до умерщвления. Уровни FITC в крови измеряли, как описано выше.

Гистопатология и иммуногистохимия

Свежую ткань печени или толстой кишки фиксировали в 10% формалине в течение 2 дней, а затем обрабатывали для разделения и окрашивания стандартными гистологическими методами.Срезы печени и тонкой кишки окрашивали НЕ и оценивали под световой микроскопией.

Для иммуногистохимического окрашивания парафиновые срезы депарафинизировали и регидратировали в соответствии со стандартными протоколами. Для извлечения антигена срезы кипятили с 0,01 М цитратным буфером (pH 6,0) в течение 30 мин. После этого срезы промывали и погружали в 3% перекись водорода / метанол на 30 мин при комнатной температуре. Затем срезы блокировали 1% бычьим сывороточным альбумином и инкубировали с кроличьими анти-MUC2 (1: 200) или кроличьими анти-ZO-1 (1: 200, Proteintech Group, Чикаго, Иллинойс, США).Затем срезы промывали и инкубировали с соответствующими вторичными антителами, промывали и визуализировали с использованием DAB (3,3 = -диаминобензидин) с контрастным красителем гематоксилином. Оптическую плотность иммуноокрашенных областей определяли количественно с использованием программного обеспечения ImageJ (Национальные институты здравоохранения США).

Функциональные тесты печени

Образцы крови были извлечены и центрифугированы после декапитации при 3000 g в течение 10 минут для сбора сыворотки. Уровни аланинаминотрансферазы (ALT) и аспартатаминотрансферазы (AST) в сыворотке определяли количественно с использованием набора для анализа ALT и набора AST (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Jiangsu, China) в соответствии с инструкциями поставщика.Данные были получены с использованием ридера для микротитрационных планшетов, установленного на 510 нм. Все образцы анализировали в трех экземплярах.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка (SEM). Анализ между двумя группами проводился с помощью непарного двустороннего критерия Стьюдента t . Анализ, включающий более двух групп, изучали двусторонним односторонним дисперсионным анализом (ANOVA) с множественным сравнением post hoc анализ. Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 7.0. P <0,05 было определено как статистически значимое.

Результаты

Характеристика биоактивных факторов из LCS

Чтобы получить первое представление о природе биоактивного фактора, LCS предварительно обрабатывали протеазой K, ДНКазой или ферментами, переваривающими углеводы, с последующей оценкой его способности усиливать муцин с помощью анализа PAS. Мы обнаружили, что только LCS, обработанные протеазой K, демонстрировали значительное снижение продукции муцина (рисунки 1A, C), подразумевая, что биоактивные метаболиты LGG могут быть разновидностью белка.Аналогичный результат был получен с помощью вестерн-блоттинга MUC2 (рис. 1В), подтверждающий открытие, описанное выше.

Рис. 1. Характеристика растворимого белка, обнаруженного с помощью LCS. LCS предварительно обрабатывали протеиназой K, ДНКазой или карбогидразой, затем расщепленные продукты применяли для обработки монослоев Caco-2, обнаруживали растворимый муцин (A) и покрытую муцином поверхность Caco-2 ( C , верхняя панель). с использованием анализа PAS экспрессию MUC2 ( B , средняя и нижняя панели) оценивали с помощью иммуноблоттинга, β-актин использовали в качестве контроля нагрузки. (D). LCS осаждали и разделяли с помощью SDS-PAGE (дорожка 2). Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего; ^∗∗ P <0,01; NS, статистической значимости нет.

Полезная активность LCS чувствительна к обработке протеазой K, что позволяет нам проанализировать белковый состав LCS с помощью SDS-PAGE и окрашивания кумасси синим. Наблюдались четыре видимые полосы с молекулярными массами примерно 80, 60, 50 и 37 кДа (рис. 1D). После этого гель вырезали и расщепляли для анализа белкового состава с помощью LC-MS / MS.Результат показал, что всего было идентифицировано 58 белков, и десять из наиболее распространенных были перечислены в таблице 1. Поскольку p40 и p75 являются наиболее распространенными белками, секретируемыми LGG, о которых ранее сообщалось Yan et al. (2007), мы задаемся вопросом, существуют ли эти два белка в нашей LCS. Однако мы обнаружили только p75, гидролазу, ассоциированную с клеточной стенкой (номер доступа gi | 199589812). Поскольку предыдущие исследования продемонстрировали, что p75 не является основным биоактивным фактором, секретируемым LGG (Yan and Polk, 2012), мы, таким образом, сосредоточили внимание на гипотетическом белке HMPREF0539_2242 (сокращенно HM0539 в этом исследовании), наиболее распространенном белке, идентифицированном в LCS (таблицы 1 , 2).При поиске HM0539 с использованием банка данных белков NCBI мы обнаружили, что это предполагаемый белок с 37,3 кДа, расчетная изоэлектрическая точка = 9,22. Поиск BLAST показал, что аминокислотная последовательность HM0539 на 92% сходна с гидролазой из L. rhamnosus (таблица 2 и дополнительная фигура S1A). Выравнивание последовательностей HM0539 с его другими аналогами LGG (p40 и p75) выявило низкую идентичность последовательностей с 13,7 и 18,9% соответственно (дополнительная фигура S1A). Полноразмерная кодирующая ДНК белка HM0539 показана в дополнительной таблице S1.Информация о геномном локусе, который содержит HM0539, показана на дополнительном рисунке S2. Геномный поиск BLAST последовательностей, доступных в базе данных GenBank, показал, что гены, кодирующие гомологи HM0539, распространяются в геномах ряда штаммов L. rhamnosus и L. casei . Результаты сравнения аминокислот этих наилучшим образом согласованных гомологичных белков с HM0539 показаны в дополнительной таблице S2 (с использованием онлайн-программного обеспечения Sequence Manipulation Suite) и на дополнительном рисунке S3 (выровнены с использованием программы DNAMAN).Биоинформатический анализ с использованием SignalP-4.1 и TMHMM server 2.0 показал, что HM0539 содержит сигнальный пептид (1–53 аминокислотных остатка) и трансмембранный участок (29–46 аминокислотных остатков), соответственно (дополнительные рисунки S1B, C). Наконец, для дальнейшего изучения биоактивности HM0539 мы рекомбинировали и очищали его с использованием системы His-tag / Ni-NTA (дополнительный рисунок S1D).

Таблица 1. Десять наиболее распространенных белков, обнаруженных с помощью ЖХ-МС / МС анализа.

Таблица 2. Внутренние пептидные последовательности HM0539, обнаруженные с помощью анализа LC / MS / MS.

Лечение HM0539 защищает от индуцированного LPS и TNF-α-индуцированного повреждения кишечного барьера in vitro

Затем мы оценили влияние HM0539 на продукцию муцина в кишечнике in vitro . Монослои Caco-2 инкубировали с различными концентрациями HM0539 (0–100 нг / мл), и было обнаружено образование муцина в растворимых ингредиентах или покрытых монослоями Caco-2. Мы обнаружили, что HM0539 может значительно индуцировать продукцию муцина и экспрессию MUC2 дозозависимым образом (рисунки 2A – C), что означает, что HM0539 имеет такую ​​же биоактивность, что и LCS, в отношении способности усиливать муцин.Затем мы исследовали, может ли HM0539 защищать кишечный барьер от повреждения, вызванного LPS или TNF-α. Вестерн-блот-анализ показал, что стимуляция LPS или TNF-α значительно снижает экспрессию кишечного белка TJ (ZO-1, окклюдин) и кишечного муцина (MUC2) (рис. 2D). Однако предварительная обработка монослоя Caco-2 HM059, очевидно, может отменить LPS- или TNF-α-индуцированное подавление этих белков. Интересно, что при использовании бензил-α-GalNAc, мощного ингибитора муцина, защитный эффект HM0539 на экспрессию ZO-1 был подавлен, что указывает на то, что HM0539 может частично защищать ZO-1 за счет увеличения продукции муцина в кишечнике (рис. 2D).Кроме того, иммунофлуоресцентное окрашивание ZO-1 показало, что контроль, HM0539 и монослой Caco-2, обработанный бензил-α-GalNAc, демонстрируют типичную картину окрашивания ZO-1. Однако эта типичная морфология была нарушена, когда Caco-2 стимулировали LPS или TNF-α (рис. 2E). Напротив, предварительная обработка Caco-2 HM0539 восстанавливает типичную морфологию ZO-1 (рис. 2E). Наконец, мы отметили, что стимуляция LPS или TNF-α снижает TEER монослоя Caco-2, что является полезным показателем для оценки целостности кишечного барьера.Точно так же предварительная обработка Caco-2 HM0539 подавляет LPS- или TNF-α-индуцированное снижение TEER, предполагая, что HM0539 может поддерживать целостность кишечника против LPS- и TNF-α-индуцированного нарушения (рис. 2F). Вместе эти результаты предполагают, что HM0539 может защищать функцию кишечного барьера от повреждения, вызванного LPS или TNF-α.

Рисунок 2. Защитное действие HM0539 на барьерную функцию кишечника. (A – C) Монослои Caco-2 были предварительно обработаны различными концентрациями HM0539 (0–100 нг / мл), были обнаружены растворимый муцин (A) и покрытая муцином поверхность Caco-2 (B) . с помощью анализа PAS.Вестерн-блоттинг ( C , верхняя панель) и денситометрический анализ ( C , нижняя панель) экспрессии MUC2. (D – F) Монослои Caco-2 предварительно обрабатывали HM0539 или бензил-α-GalNAc (ингибитор муцина), затем стимулировали LPS (1 мкг / мл) или TNF-α (10 нг / мл) в течение 6 часов. (D) Вестерн-блот-анализ MUC2, ZO-1 и окклюдина, β-актин использовали в качестве контроля нагрузки. (E) Иммунофлуоресцентное окрашивание ZO-1. (F) TEER были обнаружены для оценки целостности кишечного барьера.Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего; ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001; NS, статистической значимости нет.

Лечение HM0539 снижает восприимчивость новорожденных крыс к инфекции E. coli K1 пероральным путем

Поскольку HM0539 обладает той же способностью усиливать муцин, что и LCS in vitro , мы затем определили, имеет ли HM0539 потенциал для защиты неонатальных крыс от E.coli K1 пероральным путем. Сначала мы исследовали роль HM0539 в созревании защиты кишечника новорожденных, как описано ранее (He et al., 2017). Новорожденным крысам вводили через зонд контрольный пектин / зеин или пектин / зеиновые шарики, содержащие HM0539, один раз в день в течение 3 дней без инфекции E. coli K1. Затем ткани толстой кишки всех крыс извлекали и использовали для иммуногистохимического анализа экспрессии Ki67, MUC2, ZO-1 и муцина. Мы обнаружили, что введение HM0539 может значительно усилить экспрессию этих молекул (Рисунки 3A – D), подразумевая, что HM0539 обладает потенциалом для ускорения созревания защиты кишечника новорожденных, как и LCS.Более того, анализ FITC-декстрана показал, что введение HM0539 может снизить кишечную проницаемость новорожденных крыс (рис. 3E). Наконец, мы определили, может ли HM0539 повышать устойчивость новорожденных крыс к E. coli K1, который является распространенной кишечной бактерией, вызывающей неонатальный сепсис и менингит через кишечную транслокацию. Новорожденным крысам вводили через зонд контрольный пектин / зеин или пектин / зеиновые шарики, содержащие HM0539, один раз в день в течение 3 дней с последующим внутрижелудочным введением 5 × 10 ⁹ КОЕ E.coli K1. Как и ожидалось, введение HM0539 обеспечивает более высокую устойчивость новорожденных крыс к оральной инфекции E. coli K1, о чем свидетельствуют более низкие количества E. coli K1 в крови и CFS у мышей, обработанных HM0539, чем у мышей из контрольной группы ( Рисунок 3F). В совокупности эти результаты показали, что HM0539 достаточно для защиты новорожденных крыс от патогенеза E. coli K1.

Рис. 3. Влияние HM0539 на созревание кишечной защиты новорожденных крыс и кишечного происхождения E.coli K1-индуцированная инфекция. (A – D) Новорожденным крысам перорально вводили контрольный пектин / зеин или гранулы пектина / зеина, содержащие HM0539, в течение 3 дней, затем экстрагировали ткань толстой кишки для оценки защиты кишечника. Иммуногистохимическое окрашивание (левая панель) и полуколичественный анализ (правая панель) Ki67 (A) , MUC2 (B) и ZO-1 (C) среза толстой кишки. (D) PAS-окрашивание среза толстой кишки для оценки продукции муцина, правая панель показала PAS-положительные клетки на ворсинку. (E, F) Новорожденных крыс лечили, как описано выше, и через желудочный зонд кормили 5 × 10 ⁹ КОЕ E. coli K1, кровь и спинномозговую жидкость собирали через 60 часов. Проницаемость кишечника оценивали с помощью анализа FITC-декстрана. (E) Относительный уровень FITC-декстрана в сыворотке. (F) Количество бактерий в крови и спинномозговой жидкости. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего; ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0.001.

Лечение HM0539 защищает мышей от колита, индуцированного DSS

Учитывая, что HM0539 обладает потенциалом оказывать положительное влияние на функцию кишечного барьера, мы затем расширили его роль, чтобы предотвратить распространенное заболевание, связанное с дисфункцией кишечного барьера, включая колит и связанную с заболеванием печени бактериальную транслокацию и повреждение печени. Колит — типичное заболевание с нарушением целостности кишечника (Choksi et al., 2018). Здесь мы использовали модель DSS-индуцированного колита, хорошо зарекомендовавшую себя модель острого повреждения слизистой оболочки кишечника, для дальнейшего исследования защитного действия HM0539 на кишечник.Мышам вводили контрольный пектин / зеин или пектин / зеиновые гранулы, содержащие HM0539, как описано в разделе «Материалы и методы». Колит был вызван употреблением 3% воды DSS. Массу тела, длину толстой кишки, повреждение кишечника и экспрессию MUC2 и ZO-1 регистрировали, выявляли и анализировали для оценки степени тяжести колита. Мы обнаружили, что мыши с DSS-колитом потеряли больше веса после 5-7 дней лечения DSS, чем мыши HM0539 + DSS-колит (рис. 4A). Одновременно длина толстой кишки мышей с DSS-колитом также была значительно уменьшена по сравнению с таковой у мышей HM0539 + DSS-колит (Фигуры 4B, C).В соответствии с этими результатами мы наблюдали, что у мышей с DSS-колитом наблюдались заметные гистопатологические изменения в окрашенной HE толстой кишке с более серьезной потерей крипт и инфильтрацией лейкоцитов, чем у мышей HM0539 + DSS-колит (рис. 4D, нижняя панель). В соответствии с патологическими изменениями в толстой кишке, мы обнаружили, что обработка HM0539 восстанавливает вызванное DSS снижение уровней ZO-1 и MUC2 в кишечнике [Фигуры 4D (верхняя и средняя панели), E, ​​F]. Вместе эти результаты продемонстрировали, что HM0539 обладает профилактическим действием против колита, вызванного DSS.

Рисунок 4. Защитный эффект HM0539 при DSS-индуцированном колите. Мышей C57BL / 6 случайным образом делили на контрольную группу (CON), группу DSS-колита (DSS) и группу DSS-колита, обработанную HM0539 (HM0539 + DSS). Мышам вводили через желудочный зонд контрольный пектин / зеин или пектин / зеиновые шарики, содержащие HM0539, с 1 по 9 день. Колит DSS вызывали добавлением 3% DSS в питьевую воду с 3 по 9 день. Всех мышей умерщвляли на 12 день. оценивали тяжесть колита и дисфункцию кишечника. (A) Масса тела мышей от 1 до 7 дней после обработки DSS. (B, C) Длина толстой кишки мышей на 12 день. Иммуногистохимическое окрашивание и полуколичественный анализ MUC2 ( D , верхняя панель, E ) и ZO-1 ( D , средняя панель, F ) отдела толстой кишки. ( D , нижняя панель) Окрашивание среза толстой кишки HE. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего; ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001.

Лечение HM0539 предотвращает индуцированную LPS / GalN дисфункцию кишечного барьера, бактериальную транслокацию и повреждение печени

Затем мы определили, может ли HM0539 оказывать защитное действие против индуцированной LPS / GalN дисфункции кишечного барьера, бактериальной транслокации и повреждения печени. Мышам C57BL / 6 внутрижелудочно вводили пектин / зеиновый контроль или пектин / зеиновые шарики, содержащие HM0539, в течение 7 дней с последующей внутрибрюшинной инъекцией LPS и GalN.Ткани толстой кишки и печени были извлечены через 24 часа для иммуногистохимического анализа и окрашивания HE соответственно. Мы обнаружили, что стимуляция мышей LPS / GalN снижала кишечную экспрессию MUC2 и ZO-1 [Фиг.5A (верхняя и средняя панели), B, C], а также усиливала кишечную проницаемость (Рисунок 5D). Напротив, введение HM0539 восстановило эти параметры. Соответственно, бактериальная транслокация в печень и MNL также значительно ингибировалась в группе, обработанной HM0539, по сравнению с группой LPS / GalN (Таблица 3).Эти данные показали, что HM0539 может предотвращать индуцированную LPS / GalN дисфункцию кишечного барьера и транслокацию бактерий.

Фигура 5. Защитный эффект HM0539 на LPS-GalN-индуцированную дисфункцию кишечного барьера, бактериальную транслокацию и повреждение печени. Мышей C57BL / 6 случайным образом распределяли на контрольную группу (CON), группу LPS / GalN (LPS / GalN) и группу LPS / GalN, обработанную HM0539 (HM0539 + LPS / GalN). Мышам через желудочный зонд вводили контрольный пектин / зеин или гранулы пектин / зеин, содержащие HM0539, в течение 7 дней.Затем мышам внутрибрюшинно вводили физиологический раствор или LPS и GalN. Через 24 часа всех мышей умерщвляли. Оценивались бактериальная транслокация, дисфункция кишечного барьера и повреждение печени. Иммуногистохимическое окрашивание и полуколичественный анализ MUC2 ( A , верхняя панель, B ) и ZO-1 ( A , средняя панель, C ) среза толстой кишки. Проницаемость кишечника оценивали с использованием анализа FITC-декстрана. ( A , нижняя панель) Окрашивание среза печени HE. (D) Относительный уровень FITC-декстрана в сыворотке. (E, F) Анализ AST и ALT гомогената печени. (G, H) ELISA-анализ TNF-α и IL-6 в гомогенате печени. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего; ^∗ P <0,05, ^∗∗ P <0,01, ^∗∗∗ P <0,001.

Таблица 3. Количество бактерий в печени и гомогенате MLN.

Наконец, мы исследовали, может ли HM0539 предотвращать LPS / GalN-индуцированное повреждение печени.Окрашивание среза печени HE показало, что LPS / GalN вызывает значительное повреждение печени по сравнению с контрольной группой (рис. 5A нижняя панель), включая кровотечение, микроабсцессы и обширную инфильтрацию макрофагов и нейтрофилов. Напротив, мыши, получавшие HM0539, имели нормальную гистологию. Более того, сывороточные уровни AST и ALT значительно снизились в группе HM0539 + LPS / GalN по сравнению с таковыми в группе LPS / GalN, подтверждая, что HM0539 может предотвратить повреждение печени, вызванное LPS / DalN (Фигуры 5E, F).Более того, мы отметили, что обработка HM0539 ослабляла LPS / DalN-индуцированную секрецию провоспалительных цитокинов TNF-α и IL-6 в гомогенате печени (Фигуры 5G, H), что указывает на то, что HM0539 также проявляет противовоспалительное свойство в контексте повреждения печени. В целом эти данные позволяют предположить, что HM0539 полезен для предотвращения индуцированной LPS / GalN дисфункции кишечного барьера, транслокации бактерий и повреждения печени.

Обсуждение

Постбиотики недавно получили медицинскую помощь из-за их потенциального благотворного воздействия на здоровье хозяина.Здесь мы идентифицировали и охарактеризовали новый постбиотик, названный HM0539, из культурального супернатанта LGG. Мы обнаружили, что этот постбиотик может защищать эпителий кишечника от повреждений, вызванных LPS или TNF-α. Дальнейшие исследования in vivo продемонстрировали, что HM0539 может предотвращать не только DSS-индуцированный колит, но также вызванную LPS / GalN дисфункцию кишечного барьера, транслокацию бактерий и повреждение печени. Наше исследование дает новое понимание механизма действия пробиотиков и новую идею для профилактики и лечения заболеваний, связанных с дисфункцией кишечного барьера.

Escherichia coli , снабженная капсулой K1, может пересекать кишечный барьер и гематоэнцефалический барьер, вызывая неонатальный сепсис и менингит (Coureuil et al., 2017). Кишечная колонизация и транслокация E. coli K1 имеют решающее значение для его распространения в кровотоке и возможной системной инфекции и менингита (Croxen and Finlay, 2010; He et al., 2017; Zeng et al., 2017). Новорожденные, особенно недоношенные и дети с очень низкой массой тела при рождении, восприимчивы к E.coli K1 из-за их незрелой защиты кишечного барьера (Croxen and Finlay, 2010; Birchenough et al., 2013; Birchenough et al., 2017; He et al., 2017; Zeng et al., 2017). В нашем предыдущем исследовании было показано, что лечение LCS повышает устойчивость новорожденных крыс к оральной инфекции E. coli K1, способствуя созреванию неонатальной защиты кишечника. Однако точный компонент LCS, который оказывает это усиление барьера и защищает от болезней, остается неизвестным.В этом исследовании мы обнаружили, что HM0539, белок, секретируемый LCS, идентифицированный с помощью LC-MS / MS, был достаточным для ускорения созревания кишечной защиты новорожденных и защиты их от инфекции E. coli K1 пероральным путем. Эти данные приводят нас к выводу, что HM0539 является биоактивным компонентом супернатанта культуры LGG, а также поддерживают теорию введения продуктов, полученных из пробиотиков, для замены живых пробиотиков, чтобы избежать потенциальных рисков в определенных условиях. Для особых групп населения, таких как недоношенные дети, дети с низкой массой тела при рождении, пациенты с ослабленным иммунитетом и т. Д., введение пробиотиков необходимо проводить очень осторожно, поскольку сообщалось, что многие пробиотики, включая LGG, вызывают бактериемию и сепсис (Brecht et al., 2016; Dani et al., 2016). В нашем исследовании открытие того, что белок, полученный из пробиотиков, может оказывать мощный защитный эффект, дает новые идеи для поддержания здоровья в особых группах населения.

Интересным открытием здесь является то, что мы не обнаружили p40 в супернатанте культуры LGG. Фактически, p40 и p75 были двумя наиболее распространенными белками, очищенными из супернатанта культуры LGG ранее Yan et al.(2007). Последующие исследования показали, что p40 может ингибировать цитокин-индуцированный апоптоз кишечного эпителия, усиливает выработку кишечного муцина и IgA и сохраняет барьерную функцию кишечника (Yan et al., 2007, 2013; Yan and Polk, 2012; Wang et al., 2014, 2017) . Хотя и p40, и p75 обладают потенциалом модулировать гомеостаз кишечника, p40 оказывает более сильные эффекты, чем p75 (Yan and Polk, 2012). Здесь мы идентифицировали по крайней мере 58 белков из LCS, среди которых, однако, HM0539, но ни p40, ни p75, не был самым распространенным.Этот результат согласуется с предыдущим исследованием, опубликованным Sánchez et al. (2009), в котором также нет следов р40. Удивительно, но в этом исследовании самым распространенным белком является p75, но не HM0539. Эти противоречивые результаты, полученные Яном, Санчесом и нашей собственной группой, могут быть связаны с различными процедурами приготовления супернатанта культуры LGG, поскольку разные условия культивирования могут влиять на белок секреции LGG (Koskenniemi et al., 2009). Хотя он отличается от p40 и p75, HM0539 также обладает потенциалом защиты кишечного барьера.Таким образом, мы заключаем, что HM0539 является новым постбиотиком LGG. В настоящее время проводятся исследования по сравнению функции между p40 и HM0539.

Поскольку HM0539 играет особую роль в защите кишечного барьера, мы далее исследуем его терапевтический потенциал, используя две модели заболеваний, обычно связанных с дисфункцией кишечного барьера. Первой моделью, которую мы использовали, был колит, вызванный DSS, который является одной из наиболее часто используемых моделей колита на животных для разработки и оценки потенциальных терапевтических стратегий (Kraus and Arber, 2009).Механизм, с помощью которого DSS вызывает повреждение слизистой оболочки толстой кишки, остается неясным, но недавние исследования продемонстрировали, что сульфатные группы молекул DSS разрушают слой слизи кишечника и делают кишечный барьер более проницаемым для антигенов (Eichele and Kharbanda, 2017). Фактически, пагубное влияние DSS на барьерную функцию кишечника было обнаружено уже после 4–12 часов стимуляции. Однако на данный момент нет значимых клинических симптомов колита (Petersson et al., 2010).Кроме того, Sharma et al. (2018) показали, что потеря целостности эпителия предшествует явному воспалению и повреждению кишечника. Эти исследования продемонстрировали, что нарушение функции кишечного барьера может быть причиной колита, поэтому защита целостности кишечника с помощью HM0539 может улучшить общее заболевание.

Вторая модель, которую мы использовали, была LPS-GalN-индуцированной острой печеночной недостаточностью. Хотя существует множество доказательств того, что GalN непосредственно вызывает повреждение печени, исследования показали, что бактерии и его продукты, такие как эндотоксин, являются ключевыми факторами патогенеза этого повреждения печени (Ewaschuk et al., 2007). При печеночной недостаточности нарушается целостность кишечника, что приводит к перемещению бактерий и их продуктов в системный кровоток. Было четко показано, что GalN-индуцированная транслокация кишечных бактерий / эндотоксинов индуцирует активацию клеток Купфера и высвобождение TNF-α, что в конечном итоге приводит к тяжелой печеночной недостаточности (Morita et al., 2004). Кроме того, было обнаружено, что моноклональные антитела к эндотоксину и удаление бактерий из кишечника (например, лечение антибиотиками или колэктомия) блокируют GalN-индуцированное повреждение печени (Morita et al., 2004). Таким образом, как и в модели DSS-колита, дисфункция кишечного барьера также является критическим триггером воспаления в модели LPS / GalN. Этот сценарий может объяснить, почему HM0539 может облегчить повреждение печени в этой модели печеночной недостаточности. Взятые вместе, эти результаты позволяют предположить, что HM0539 имеет не только большой потенциал в предотвращении дисфункции кишечного барьера, но также является эффективной профилактикой заболеваний, связанных с дисфункцией кишечного барьера. Для выяснения положительного механизма действия HM0539 необходимы дальнейшие исследования.

Ограничение, на которое здесь следует обратить внимание, — это непонятное понимание полезной роли HM0539 на барьерную функцию кишечника. Как обсуждалось выше, HM0539 достиг своего защитного действия от болезней, главным образом, за счет усиления функции физического барьера кишечника, такой как слой слизи, экспрессия TJ и целостность кишечника. Однако иммунная система кишечника и микробиота кишечника также являются важными составляющими барьерной функции кишечника (Maloy and Powrie, 2011; Deshmukh et al., 2014; Lv et al., 2014). Фактически, микробиота кишечника, иммунная система кишечника и физический барьер кишечника комплексно взаимодействуют друг с другом, чтобы поддерживать гомеостаз кишечника. Нарушение или изменение одного из них может привести к изменению других аспектов (Peterson, Artis, 2014). Например, слизь может образовывать особую структуру для поддержания высоких концентраций антимикробных молекул (дефенсинов и секреторного IgA) вблизи эпителиального слоя кишечника, что имеет решающее значение для поддержания микробиоты кишечника (Maloy and Powrie, 2011).В свою очередь, микробиота также может влиять на гликозилирование муцина O кишечника MUC2 (Arike et al., 2017). Слизь и муцины бокаловидных клеток и энтероцитов могут взаимодействовать с иммунной системой кишечника и модулировать ее (Pelaseyed et al., 2014). Клетки кишечного эпителия, основная часть физического барьера кишечника, всегда функционируют как посредник кишечного гомеостаза, высвобождая факторы, влияющие на колонизацию микробов, обнаруживая как полезные, так и вредные микробы, и регулируя иммунные реакции кишечника (Maloy and Powrie, 2011).Таким образом, взаимосвязь между физическим барьером кишечника, иммунной системой кишечника и микробиомом кишечника является взаимовыгодной. Учитывая, что HM0539 оказывает сильное положительное влияние на физический барьер кишечника, мы полагаем, что он также имеет большой потенциал в модуляции иммунной системы кишечника и микробиоты кишечника.

Таким образом, мы идентифицировали и очистили новый растворимый в LGG белок, названный HM0539, и охарактеризовали его защитную функцию кишечного барьера в отношении стимуляции секреции муцина и экспрессии белка TJ и снижения проницаемости кишечника.Кроме того, мы исследовали его терапевтический потенциал, представив две модели, связанные с дисфункцией барьера: DSS-индуцированный колит и LPS-GalN-индуцированная острая печеночная недостаточность. Эти результаты подтверждают потенциально широкое применение HM0539 при заболеваниях, связанных с дисфункцией кишечного барьера, в то время как точный механизм требует дальнейшего изучения.

Авторские взносы

HC, S-HH, JG, XH, YL и YuW разработали и разработали эксперименты. JG, YL, YuW, TH, LL, ZG, QZ, SY, YiW, WY и ZZ проводили эксперименты.JG, ZG, LL, WY, SY, YuW и HC проанализировали данные. S-HH предоставила реагенты, материалы и инструменты для анализа. JG, HC, YuW, YL и TH участвовали в его разработке и координации, а также помогли составить черновик рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

Этот проект получил финансовую поддержку Национального научного фонда молодых ученых Китая (№ 81801985), Китайского фонда постдокторантуры (№ 2018M633076) и Программы бакалавриата по инновациям и предпринимательству провинции Гуандун в Китае (№201612121071).

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.00477/full#supplementary-material

РИСУНОК S1 | Биоинформатический анализ и очистка HM0539. (A) Выравнивания аминокислотных последовательностей между HM0539, гидролазой и ранее идентифицированными p40 и p75. Последовательности идентифицировали с помощью поиска BLAST и выравнивали с помощью программы DNAMAN. (B) Присутствие и расположение сайтов расщепления сигнального пептида в HM0539 было предсказано с использованием SignalP 4.1 Server. (C) Прогнозирование трансмембранной спирали (спиралей) HM0539 выполняли с использованием TMHMM Server 2.0. (D) HM0539 рекомбинировали и очищали с использованием системы His-tag / Ni-NTA.Дорожка 2: клеточные лизаты; Дорожки: 3–5: элюированный HM0539.

РИСУНОК S2 | Генетическая карта локусов, необходимых для секреции HM0539. Точное расположение HM0539 в генетическом локусе показано сплошной черной стрелкой. Места и направления транскрипции генов представлены стрелками, а соответствующие названия белков показаны над или под ними. Шкала (в килобазах) показана внизу.

РИСУНОК S3 | Аминокислотное выравнивание HM0539 и его гомологичного белка из штамма Lactobacillus rhamnosus ATCC 21052, Lactobacillus rhamnosus, , штамм NCTC13764, Lactobacillus rhamnosus, штамм , LR-B1, Lactobacillus 9013, штамм LR-B1, , Lactobacillus Rhamnosus , штамм LR-B1, casei , штамм LC5, Lactobacillus casei ATCC 393.

ТАБЛИЦА S1 | Полноразмерная кодирующая ДНК белка HM0539.

ТАБЛИЦА S2 | Результаты сравнения аминокислотных последовательностей 19 наиболее согласованных гомологичных белков с HM0539.

Сноски

1. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/index.html

Список литературы

Агилар-Тоала, Дж., Гарсия-Варела, Р., Гарсиа, Х., Мата-Аро, В., Гонсалес-Кордова, А., Вальехо-Кордова, Б. и др. (2018). Постбиотики: развивающийся термин в области функциональных продуктов питания. Trends Food Sci. Technol. 75, 105–114. DOI: 10.1016 / j.tifs.2018.03.009

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Арике, Л., Хольмен-Ларссон, Дж., И Ханссон, Г. К. (2017). На О-гликозилирование муцина Muc2 кишечника влияет микробиота и регулируется дифференциальной экспрессией гликозилтранфераз. Гликобиология 27, 318–328. DOI: 10.1093 / glycob / cww134

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ассимакопулос, С.Ф., Триантос, К., Марулис, И., и Гогос, К. (2018). Роль барьерной функции кишечника в здоровье и болезнях. Гастроэнтерол. Res. 11, 261–263. DOI: 10.14740 / gr1053w

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Biagioli, M., Capobianco, D., Carino, A., Marchianò, S., Fiorucci, C., Ricci, P., et al. (2018). Дивергентная эффективность многовидовых пробиотических препаратов на структуру кишечной микробиоты зависит от метаболических свойств. Фронт.Microbiol. 9: 2669. DOI: 10.3390 / nu11020325

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бирчено, Г. М., Далгакиран, Ф., Виткомб, Л. А., Йоханссон, М. Э., Маккарти, А. Дж., Ханссон, Г. К. и др. (2017). Постнатальное развитие слизистой оболочки тонкой кишки определяет возрастную региоселективную восприимчивость к инфекции Escherichia coli K1. Sci. Реп. 7:83. DOI: 10.1038 / s41598-017-00123-w

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бирчено, Г.M., Johansson, M.E., Stabler, R.A., Dalgakiran, F., Hansson, G.C., Wren, B.W. и др. (2013). Нарушены врожденные защитные механизмы желудочно-кишечного тракта новорожденных в ответ на колонизацию нейропатогенной Escherichia coli . Заражение. Иммун. 81, 3264–3275. DOI: 10.1128 / IAI.00268-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Брехт, М., Гарг, А., Лонгстафф, К., Купер, К., и Андерсен, К. (2016). Lactobacillus sepsis после лапаротомии у недоношенного ребенка: предостережение. Неонатология 109, 186–189. DOI: 10.1159 / 000441965

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bron, P.A., Kleerebezem, M., Brummer, R.-J., Cani, P.D., Mercenier, A., Macdonald, T. T., et al. (2017). Могут ли пробиотики модулировать заболевание человека, влияя на барьерную функцию кишечника? Br. J. Nutr. 117, 93–107. DOI: 10.1017 / S0007114516004037

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чокси, Ю.А., Редди В. К., Сингх К., Барретт К. В., Шорт С. П., Паранг Б. и др. (2018). BVES требуется для поддержания целостности эпителия толстой кишки при экспериментальном колите путем изменения кишечной проницаемости. Mucosal Immunol. 5, 1363–1374. DOI: 10.1038 / s41385-018-0043-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cicenia, A., Scirocco, A., Carabotti, M., Pallotta, L., Marignani, M., and Severi, C. (2014). Постбиотическая активность факторов, производных лактобацилл. J. Clin. Гастроэнтерол. 48, S18 – S22. DOI: 10.1097 / MCG.0000000000000231

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Coureuil, M., Lécuyer, H., Bourdoulous, S., and Nassif, X. (2017). Путешествие в мозг: понимание того, как бактериальные патогены проникают через гематоэнцефалический барьер. Nat. Rev. Microbiol. 15, 149–159. DOI: 10.1038 / nrmicro.2016.178

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дэни, К., Ковьелло, К., Корсини, И., Арена, Ф., Антонелли, А., Россолини, Г. М. (2016). Lactobacillus sepsis и пробиотическая терапия у новорожденных: два новых случая и обзор литературы. Am. J. Perinatol. Rep. 6, e25 – e29. DOI: 10.1055 / с-0035-1566312

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Deshmukh, H. S., Liu, Y., Menkiti, O. R., Mei, J., Dai, N., O’leary, C.E., et al. (2014). Микробиота регулирует гомеостаз нейтрофилов и устойчивость хозяина к сепсису Escherichia coli K1 у новорожденных мышей. Nat. Med. 20, 524–530. DOI: 10,1038 / нм. 3542

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Донато, К. А., Гаро, М. Г., Ван, Ю. Дж. Дж., И Шерман, П. М. (2010). Lactobacillus rhamnosus GG ослабляет индуцированную интерфероном-γ и фактором некроза опухоли-α дисфункцию барьера и провоспалительную передачу сигналов. Микробиология 156, 3288–3297. DOI: 10.1099 / mic.0.040139-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эйхеле, Д.Д., Харбанда К. К. (2017). Модель колита с декстраном сульфатом натрия на мышах: незаменимый инструмент для улучшения нашего понимания патогенеза воспалительных заболеваний кишечника. World J. Gastroenterol. 23, 6016–6029. DOI: 10.3748 / wjg.v23.i33.6016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ewaschuk, J., Endersby, R., Thiel, D., Diaz, H., Backer, J., Ma, M., et al. (2007). Пробиотические бактерии предотвращают повреждение печени и поддерживают функцию барьера толстой кишки на мышиной модели сепсиса. Гепатология 46, 841–850. DOI: 10.1002 / hep.21750

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

ФАО и ВОЗ (2001). Здоровые и питательные свойства пробиотиков в пищевых продуктах, включая сухое молоко с живыми молочнокислыми бактериями. Antergia: ФАО / ВОЗ, 1–34.

Харб, Х., Ван Тол, Э., Хейне, Х., Брааксма, М., Гросс, Г., Оверкамп, К. и др. (2013). Неонатальный прием обработанного супернатанта из Lactobacillus rhamnosus GG улучшает аллергическое воспаление дыхательных путей у мышей в более позднем возрасте. Clin. Exp. Аллергия 43, 353–364. DOI: 10.1111 / cea.12047

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хе Х., Цзэн К., Путиякуннон С., Цзэн З., Янг В., Цю Дж. И др. (2017). Lactobacillus rhamnosus GG супернатант повышает устойчивость новорожденных к системной инфекции Escherichia coli K1 за счет ускорения развития защиты кишечника. Sci. Отчет 7: 43305. DOI: 10.1038 / srep43305

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хилл, Д., Сугрю, И., Тобин, К., Хилл, К., Стэнтон, К., и Росс, Р. П. (2018). Группа Lactobacillus casei : история и приложения, связанные со здоровьем. Фронт. Microbiol. 9: 2107. DOI: 10.3389 / fmicb.2018.02107

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Катаяма, Х., Нагасу, Т., и Ода, Ю. (2001). Улучшение протокола расщепления в геле для снятия отпечатков пептидных масс с помощью матричной лазерной десорбции / ионизации времяпролетной масс-спектрометрии. Rapid Commun. Масс-спектрометрия. 15, 1416–1421. DOI: 10.1002 / RCM.379

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кениг, Дж., Уэллс, Дж., Кани, П. Д., Гарсия-Роденас, К. Л., Макдональд, Т., Мерсенье, А. и др. (2016). Функция кишечного барьера человека при здоровье и болезни. Clin. Пер. Гастроэнтерол. 7: e196. DOI: 10.1038 / ctg.2016.54

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кониси, Х., Фудзияма, М., Танака, Х., Уэно, Н., Мориичи, К., Сасадзима, Дж. И др. (2016). Феррихром, полученный из пробиотиков, подавляет прогрессирование рака толстой кишки через JNK-опосредованный апоптоз. Nat. Commun. 7: 12365. DOI: 10.1038 / ncomms12365

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Koskenniemi, K., Koponen, J., Kankainen, M., Savijoki, K., Tynkkynen, S., De Vos, W. M., et al. (2009). Протеомный анализ Lactobacillus rhamnosus GG с использованием 2-D DIGE и масс-спектрометрии показывает дифференцированное производство белка в лабораторных и промышленных средах для выращивания. J. Proteome Res. 8, 4993–5007. DOI: 10.1021 / pr

23

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лебеер, С., Брон, П. А., Марко, М. Л., Ван Пийкерен, Ж.-П., Мазервэй, М. О. К., Хилл, К. и др. (2018). Идентификация пробиотических эффекторных молекул: настоящее состояние и перспективы на будущее. Curr. Мнение. Biotechnol. 49, 217–223. DOI: 10.1016 / j.copbio.2017.10.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лопетузо, Л.Р., Скальдаферри, Ф., Бруно, Г., Петито, В., Франчески, Ф., и Гасбаррини, А. (2015). Терапевтическое управление утечкой кишечного барьера: возрастающая роль защитных барьеров слизистой оболочки. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 19, 1068–1076.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Lv, L.-X., Hu, X.-J., Qian, G.-R., Zhang, H., Lu, H.-F., Zheng, B.-W., et al. (2014). Введение Lactobacillus salivarius LI01 или Pediococcus pentosaceus LI05 улучшает острое повреждение печени, вызванное D-галактозамином у крыс. Заявл. Microbiol. Biotechnol. 98, 5619–5632. DOI: 10.1007 / s00253-014-5638-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мак, Д. Р., Майкл, С., Вей, С., Макдугалл, Л., и Холлингсворт, М. А. (1999). Пробиотики подавляют энтеропатогенную приверженность E. coli in vitro, индуцируя экспрессию гена кишечного муцина. Am. J. Physiol. 276, G941 – G950. DOI: 10.1152 / ajpgi.1999.276.4.G941

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Марчези, Дж.Р., Адамс, Д. Х., Фава, Ф., Гермес, Г. Д., Хиршфилд, Г. М., Холд, Г. и др. (2016). Микробиота кишечника и здоровье хозяина: новый клинический рубеж. Кишечник 65, 330–339. DOI: 10.1136 / gutjnl-2015-309990

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартенс, Э. К., Нойман, М., Десаи, М. С. (2018). Взаимодействие комменсалов и патогенных микроорганизмов со слизистой оболочкой кишечника. Nat. Rev. Microbiol. 16, 457–470. DOI: 10.1038 / s41579-018-0036-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартин, Р., Laval, L., Chain, F., Miquel, S., Natividad, J., Cherbuy, C., et al. (2016). Bifidobacterium animalis ssp. lactis CNCM-I2494 восстанавливает проницаемость кишечного барьера у мышей с хроническим легким воспалением. Фронт. Microbiol. 7: 608. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.00608

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Морита Т., Танабэ Х., Такахаши К. и Сугияма К. (2004). Прием резистентного крахмала защищает от притока эндотоксина из кишечного тракта и уменьшает повреждение печени у крыс, вызванное D-галактозамином. J. Gastroenterol. Гепатол. 19, 303–313. DOI: 10.1111 / j.1440-1746.2003.03208.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Орландо, А., Линсалата, М., Нотарникола, М., Тутино, В.

Список компаний по производству рыбной еды в Аргентине

CBD Oil Преимущества, побочные эффекты, взаимодействие с лекарствами [2020]

Даже по мере того, как знания о лекарственной ценности марихуаны распространяются по всему миру, все больше и больше штатов США легализуют ее использование. И вместе с этим продукт под названием масло CBD также набирает популярность в качестве терапевтического препарата для естественного лечения таких проблем со здоровьем, как беспокойство, бессонница и даже рак.

Итак, прежде чем мы подробно объясним преимущества масла CBD, давайте сначала разберемся, что такое CBD на самом деле.

Несмотря на то, что знания о лекарственной ценности марихуаны распространяются по всему миру, все больше и больше штатов США легализуют ее использование. И вместе с этим продукт под названием масло CBD также набирает популярность в качестве терапевтического препарата для естественного лечения таких проблем со здоровьем, как беспокойство, бессонница и даже рак.

Итак, прежде чем мы подробно объясним преимущества масла CBD, давайте сначала разберемся, что такое CBD на самом деле.

Что такое масло CBD?

CBD или каннабидиол — одно из 104 химических соединений, известных как каннабиноиды, обнаруженных в растении каннабис, которое принадлежит к разновидностям Cannabis sativa. CBD — это не опьяняющий компонент растения, и считается, что он оказывает множество терапевтических эффектов на человеческое тело и разум.

Поскольку CBD не является психоактивным компонентом, масло CBD не вызывает «кайфа» или ощущения эйфории, которое обычно ассоциируется с каннабисом или марихуаной. В масле CBD нет или незначительные следы ТГК (тетрагидроканнабинола — еще одно соединение, содержащееся в растении), который действительно является психоактивным каннабиноидом и ответственен за знаменитый кайф от марихуаны.

Каннабидиол извлекается из каннабиса или конопли (растения, принадлежащие к семейству Cannabis Sativa) и разбавляется маслом-носителем, таким как кокосовое масло или масло семян конопли, для создания масла CBD. Из-за разногласий вокруг растения каннабис, CBD промышленного класса извлекается из конопли (другого растения, которое относится к видам Cannabis Sativa), так как в нем менее 0,3% THC.

Производители продают масла CBD в различных формах — настойка, концентрат, мягкие гелевые капсулы, раствор для местного применения, спреи для под язык, воск, пищевые продукты, кремы для кожи и пластыри.Концентрация CBD в каждом из этих продуктов может варьироваться.

Хотя несколько исследований продемонстрировали преимущества масла CBD для пациентов, страдающих эпилепсией, проблемами беспокойства, проблемами с сердцем, шизофренией, воспалением, хронической болью и зависимостью, исследования все еще продолжаются, и ученые не совсем уверены в точном уровне эффективности масла CBD в лечение этих недугов.

Преимущества масла CBD:

Доказано, что каннабидиол является хорошим средством от многих заболеваний.Прежде чем мы более подробно обсудим преимущества масла CBD для человеческого тела и разума, мы должны добавить, что использование масла CBD в любой форме довольно безопасно, поскольку не приводит к зависимости или толерантности к препарату. Таким образом, это отличный выбор для тех, кто пытается избавиться от зависимости или не употреблять наркотики. До сих пор сообщалось, что масло CBD помогает при:

1. Облегчение хронической боли и воспаления

Люди, страдающие от хронической боли, вызванной фибромиалгией, испытали облегчение после использования масла CBD.Также было обнаружено, что использование масла CBD обеспечивает общее обезболивание и предотвращает дегенерацию нервной системы.

В Канаде одобрен для лечения рассеянного склероза и боли при раке. По словам авторов исследования, опубликованного в Журнале экспериментальной медицины, CBD значительно уменьшил хроническое воспаление и боль у некоторых мышей и крыс. Исследователи предположили, что CBD может обеспечить новое лечение хронической боли.

Хроническое воспаление, по данным Национального центра биотехнологической информации, приводит ко многим неинфекционным заболеваниям, таким как болезни сердца, рак, болезнь Альцгеймера, диабет 1 типа и даже аутоиммунные заболевания.Исследования показывают, что CBD может лечить боль и, в свою очередь, облегчать эти заболевания.

2. Успокаивающая эпилепсия

Доказано, что CBD обладает противосудорожными свойствами, которые могут успешно лечить детей с лекарственно-устойчивыми типами неврологических расстройств, таких как эпилепсия.

В исследовании, опубликованном в Медицинском журнале Новой Англии, CBD показал снижение частоты приступов на 23 процентных пункта по сравнению с теми, кто принимал плацебо.

Фактически, в июне 2018 года советники Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) одобрили рецептурное использование Epidiolex, очищенной формы масла CBD, для лечения двух редких и тяжелых форм эпилепсии у пациентов в возрасте от 2 лет. и старше.Эти две формы эпилепсии — синдром Леннокса-Гасто (LGS) и синдром Драве (DS) — обычно не поддаются лечению противосудорожными препаратами.

Epidiolex оказался первым одобренным FDA препаратом, который содержит очищенную форму препарата, полученного из марихуаны. Этот препарат уменьшает судороги, а иногда и вовсе купирует их. Замечательные визуальные доказательства его воздействия на детей, страдающих «детской эпилепсией», доступны в Интернете для просмотра.

25 июня Dr.Скотт Готтлиб от имени FDA заявил: «Сегодня FDA одобрило очищенную форму лекарственного препарата каннабидиол (CBD)… Новый продукт был одобрен для лечения припадков, связанных с двумя редкими тяжелыми формами эпилепсии, у пациентов с двухлетним заболеванием. возраст и старше ».

Исследования также показали, что CBD может помочь в лечении осложнений, связанных с эпилепсией, таких как нейродегенерация, повреждение нейронов и психические заболевания.

3. Беспокойство и депрессия

По данным Американской ассоциации тревожности и депрессии, депрессия поражает 6% населения США, а тревога — 18% населения США.Их исследования показывают, что масло CBD может помочь с обеими проблемами.

В то время как врачи обычно советуют людям, страдающим хронической тревогой, избегать каннабиса, поскольку даже следы THC могут вызывать или усиливать тревогу и паранойю, авторы обзора, опубликованного в журнале Neurotherapeutics в 2015 году, пришли к выводу, что CBD, непсихоактивное соединение, может действительно помогает снизить тревожность у людей с определенными поведенческими расстройствами, связанными с тревогой, такими как: —

• Посттравматическое стрессовое расстройство (ПТСР)
• Общее тревожное расстройство
• Паническое расстройство
• Социальное тревожное расстройство
• Обсессивно-компульсивное расстройство ( ОКР)
• Расстройства, связанные со злоупотреблением психоактивными веществами

Однако эти выводы были получены в результате экспериментальных исследований, клинических испытаний и эпидемиологических исследований, и на данный момент исследования на людях отсутствуют.

CBD также снижает стресс и дискомфорт, связанный с публичными выступлениями.

Что касается депрессии, то было замечено, что CBD снижает депрессию за счет усиления как серотонинергических, так и глутаматных сигналов коры головного мозга (оба из которых отсутствуют у людей, страдающих депрессией).

4. Снижение окислительного стресса

Окислительный стресс — это состояние, при котором в организме слишком много свободных радикалов, и антиоксиданты не могут нейтрализовать их все. В наши дни эта проблема возникла сравнительно недавно из-за растущей токсичности в нашей окружающей среде.

Два отдельных исследования показали, что масло CBD обладает антиоксидантными и нейропротекторными свойствами, которые помогают уменьшить неврологические повреждения, вызванные свободными радикалами.

5. Помощь при лечении сердечных заболеваний

Сердечные заболевания также являются растущей проблемой во всем мире. Фактически, это одна из основных причин смерти в Соединенных Штатах. Здоровая диета и образ жизни — главный приоритет для таких людей, но масло CBD также может помочь.

В небольшом исследовании, опубликованном в JCI Insight в 2017 году, исследователи отметили, что CBD может помочь предотвратить колебания артериального давления из-за стресса.В этом исследовании девяти здоровым добровольцам-мужчинам была дана однократная доза CBD или плацебо. У тех, кто получал CBD, было более низкое кровяное давление по сравнению с теми, кто получал плацебо, как до, так и после стрессового события.

По словам исследователей, каннабидиол помогает:

• Уменьшает закупорку артерий
• Уменьшает вызванную стрессом сердечно-сосудистую реакцию
• Снижает кровяное давление
• Снижает уровень холестерина

Масло CBD помогает предотвратить окислительный стресс и воспаление, оба из которых являются часто предвестники сердечных заболеваний.

6. Борется с бактериями с множественной лекарственной устойчивостью

По мнению многих экспертов, каннабиноиды (включая CBD) обладают необычной способностью уничтожать бактерии (особенно штаммы, устойчивые к лекарствам). Хотя все еще необходимы дополнительные исследования, чтобы понять, как и почему это работает, согласно исследованию 2011 года, CBD может замедлить прогрессирование туберкулеза у крыс. Исследователи пришли к выводу, что CBD, вероятно, делает это путем подавления пролиферации Т-клеток, а не за счет наличия антибактериальных свойств.

Каким бы ни был механизм уничтожения бактерий, CBD, безусловно, кажется мощным оружием против недавно появившихся устойчивых к антибиотикам «супербактерий».

7. Лечите диабет 1 типа

Мы уже обсуждали, как масло CBD помогает бороться с воспалением. То же самое верно и в случае, когда иммунная система атакует клетки поджелудочной железы, вызывая диабет 1 типа.

Исследование, опубликованное в 2016 году рецензируемым международным научным журналом Clinical Hemorheology and Microcirculation, показало, что CBD может облегчить это воспаление в поджелудочной железе.

Точно так же в документе, представленном в том же году в Лиссабоне, Португалия, было высказано предположение, что CBD может уменьшить воспаление и защитить или даже отсрочить развитие диабета 1 типа.

8. Помощь в лечении шизофрении

Шизофрения — серьезное и сложное психическое заболевание, которое обычно лечится с помощью терапии и фармацевтических препаратов (которые часто имеют серьезные побочные эффекты). Принимая во внимание, что многие люди нашли масло CBD полезным для уменьшения галлюцинаций за вычетом побочных эффектов.

Согласно обзору исследований за март 2015 года, CBD является безопасным, эффективным и хорошо переносимым средством лечения психоза. Но необходимы дополнительные исследования, чтобы внедрить КБР в клиническую практику.

Вы должны помнить, что ТГК, психоактивное соединение, содержащееся в марихуане, на самом деле может усиливать психоз среди пострадавших, в то время как КБД только помогает уменьшить его и может даже противодействовать психозу, вызванному злоупотреблением марихуаной.

Еще одно исследование, опубликованное в Current Pharmaceutical Design, другом рецензируемом медицинском журнале, освещающем вопросы, связанные с фармакологией и медицинской химией, показало, что CBD имеет эффекты, аналогичные эффектам некоторых антипсихотических препаратов, и что это соединение намного безопаснее и эффективнее. действенный вариант для людей с шизофренией.

9. Лечить кожные заболевания

Несколько исследований показали, что масло CBD обладает высоким потенциалом для лечения кожных заболеваний, таких как экзема, путем стимулирования аномальной гибели клеток.

Он также помогает регулировать выработку кожного сала, тем самым уменьшая угри. Исследование 2014 года, опубликованное в Journal of Clinical Investigation, биомедицинском журнале, опубликованном Американским обществом клинических исследований, показало, что CBD помогает снизить выработку кожного сала, отчасти из-за противовоспалительных свойств CBD.По этим причинам CBD вполне может стать в будущем средством лечения вульгарных угрей, наиболее распространенной формы прыщей.

Интересно отметить, что каннабидиол также содержит определенные питательные вещества, такие как витамин Е, которые помогают питать и защищать кожу.

10. Борьба с зависимостью

Масло CBD может помочь людям с зависимостью преодолеть симптомы абстиненции, говорится в обзоре, опубликованном в журнале Substance Abuse в 2015 году. В своем отчете они проанализировали 14 ранее опубликованных исследований, в которых ученые определили, что CBD может иметь терапевтический эффект на людей с опиоидной, кокаиновой и / или психостимулирующей зависимостью.

Они также обнаружили, что CBD может помочь в лечении людей с каннабисной и табачной зависимостью. Исследователи обнаружили доказательства того, что КБД блокирует, а иногда и снижает влияние ТГК на разум.

Наше исследование, опубликованное в журнале Addictive Behaviors, показало, что курильщики, которые использовали ингаляторы, содержащие CBD, выкуривали меньше сигарет, чем обычно. У них также не было никаких симптомов отмены, таких как тяга к никотину.

В аналогичном обзоре, опубликованном в Neurotherapeutics, отмечается, что CBD уменьшает симптомы, связанные со злоупотреблением психоактивными веществами, такие как беспокойство, симптомы, связанные с настроением, боль и бессонница.

Необходимы дополнительные исследования, но эти результаты определенно указывают на возможность того, что КБР помогает предотвратить или уменьшить симптомы отмены.

11. Борьба с определенными типами рака

Людям, борющимся с раком, CBD может предоставить им естественную альтернативу облегчению боли и симптомов.

Хотя необходимо провести дополнительные исследования роли CBD в лечении рака, любые имеющиеся в настоящее время данные выглядят многообещающими.

По данным Американского онкологического общества, масло CBD может замедлять рост и распространение определенных типов рака (у животных), учитывая, что это психоактивное соединение эффективно борется с окислительным стрессом и воспалением.

Согласно обзору, опубликованному в British Journal of Clinical Pharmacology, CBD может значительно помочь предотвратить распространение рака. Исследователи отметили, что это соединение подавляет рост раковых клеток и способствует их разрушению.

12. Болезнь Альцгеймера

CBD может предотвратить развитие дефицита социального признания среди пациентов, говорится в исследовании, опубликованном в Journal of Alzheimer’s Disease. Это означает, что CBD может помочь людям на ранних стадиях болезни Альцгеймера сохранить способность узнавать знакомые лица и, в свою очередь, замедлить прогрессирование болезни.

Полезно ли масло CBD для всех? Кому это выгодно?

Согласно недавнему отчету Всемирной организации здравоохранения, продукты CBD обычно безопасны для всех. Однако если вы беременны, это может негативно повлиять на ваше тело и здоровье вашего будущего ребенка. Кроме того, если вы в настоящее время принимаете какие-либо лекарства, вам необходимо проконсультироваться с врачом, прежде чем использовать масло CBD. Это необходимо для того, чтобы избежать отрицательных выпадений при смешивании двух компонентов.

Масла CBD оказывают положительное влияние как на людей, так и на животных.

У людей они могут помочь улучшить или вылечить широкий спектр проблем со здоровьем, от повседневных недугов до некоторых хронических состояний. Преимущества CBD для здоровья включают:

• Акне
• Беспокойство
• Депрессия
• Хроническая боль
• Воспаление
• Бессонница
• Эпилепсия
• Глаукома
• Диабет 1 типа
• Потеря аппетита и массы тела
• Болезнь Паркинсона Болезнь Альцгеймера
• Болезни сердца
• Некоторые формы рака

Также было обнаружено, что КБД помогает некоторым животным преодолевать аналогичные проблемы со здоровьем благодаря тому факту, что у всех млекопитающих есть эндоканнабиноидная система.

В частности, для кошек и собак, которых мы, люди, предпочитаем держать в качестве домашних животных, масло CBD может помочь с:

• Чрезмерным лаем или плачем
• Домашние животные ладят с другими домашними животными
• Облегчение боли
• Расслабление домашних животных перед поездкой в ​​приют ветеринар или дальние поездки
• Отсутствие аппетита
• Боязнь разлуки

С домашними животными трудно определить точную дозировку. Но для начала рекомендуется доза в 1 мг на 10 фунтов веса тела.При необходимости вы увеличиваете дозу до 5 мг для той же массы тела. В некоторых случаях может потребоваться более высокая доза. Однако перед увеличением дозировки лучше проконсультироваться с ветеринаром. Повторяйте дозу 3-4 раза в день для лучшего эффекта.

Как работает масло CBD?

Чтобы подействовать, каннабиноиды, такие как CBD, присоединяются к определенным рецепторам в эндоканнабиноидной системе (ECS) организма, которая представляет собой сложную биологическую систему, отвечающую за регулирование определенных конкретных аспектов функций организма, таких как память, сон и настроение, а также метаболические процессы. такие процессы, как энергетический баланс.

Масла CBD, как полагают, также улучшают несколько других состояний здоровья. Согласно недавнему исследованию, все эти проблемы со здоровьем вызваны дерегулированием ECS.

Интересно, что эндоканнабиноидная система, о которой большинство людей не слышали до недавнего времени, была обнаружена в результате различных исследований и исследований воздействия каннабиса на организм и поэтому была названа в честь самого растения.

ECS, состоящий из эндоканнабиноидов и их рецепторов, распространяется по всему телу, от мозга и других органов до желез и иммунных клеток.Эта система вызывает различные реакции в разных частях тела. Однако все дело в гомеостазе или внутреннем балансе. Рецепторы в головном мозге контролируют координацию и движение, боль, эмоции и настроение, мышление, аппетит и воспоминания, среди других функций, в то время как рецепторы иммунной системы влияют на боль и воспаление.

Воодушевляющее чувство эйфории после долгой пробежки или после полового акта вызывается эндоканнабиноидами, которые стимулируются этими естественными действиями, заставляя вас чувствовать себя «кайфом» — чувство приподнятости без боли или без боли.

КБД и ТГК действуют как внешние стимуляторы, которые оказывают схожее действие на эту очень мощную систему организма, вызывая различные реакции на разные части тела.

Сколько времени нужно, чтобы CBD вступил в силу?

Большинство людей используют масло CBD, проглатывая его с помощью капельницы. Учитывая, что он используется сравнительно недавно, его точная дозировка еще не установлена. Следовательно, также трудно определить точные временные рамки, в которые он вступит в силу. Было замечено, что разные люди реагируют на КБР с разной скоростью и по-разному.

Хотя в этой области необходимы более обширные исследования, до сих пор не было зарегистрировано ни одного случая передозировки CBD. Кроме того, существует очень мало побочных эффектов, что делает передозировку практически невозможной.

Большинство компаний предоставят вам приблизительную дозировку на этикетке или в руководстве. Если вы принимаете его в качестве профилактической добавки или лекарства, придерживайтесь этих инструкций.

Некоторые могут увидеть заметные изменения в течение нескольких секунд, а другие могут ничего не замечать в течение нескольких недель.Если вы принимаете его, например, от воспаления или боли и не видите улучшения в течение нескольких недель, вы можете увеличить дозировку, но, конечно, после консультации с врачом.

Считается, что небольшая доза CBD 3-4 раза в день имеет больше терапевтических преимуществ, чем одна большая доза.

Однако следует помнить, что масло CBD, хотя само по себе вполне безопасно, может вступать в реакцию с другими лекарствами, особенно со стероидами и опиоидами. Поэтому всегда консультируйтесь с врачом, прежде чем пробовать такие народные методы лечения.

CBD Oil Побочные эффекты:

Обзор: перевешивают ли преимущества CBD Oil побочные эффекты?

Несмотря на свои проблемы безопасности, нельзя отрицать, как много людей все чаще выбирают продукты КБР более фармацевтических единиц для лечения различных заболеваний — как физического, так и психического.