Коктейль «Б-52» — пошаговый рецепт с фото
Приготовление коктейля «Б-52»:
1 Готовим коктейль «Б-52» классическим способом.
Классический способ приготовления этого коктейля является методом «билд» (построения) — то есть все ингредиенты последовательно укладываются друг на друга слоями. Это будет легко сделать с помощью барной ложки. Итак, первым слоем аккуратно и медленно наливаем по краю рюмки кофейный ликёр, за ним — сливочный ирландский, а заканчиваем композицию ликёром «Куантро». Слоя коктейля должны быть хорошо видимы и различимы.2 Подаём коктейль «Б-52».
Перед подачей коктейль необходимо поджечь с помощью зажигалки и быстро выпить. Кроме того, есть еще один способ употребления этого безумного напитка: вставив соломинку в бокал, начиная с нижнего слоя, опустошайте его содержимое. Брать рюмку в руки можно только за нижнее основание, так как очень легко обжечься. Не зря коктейль назвали в честь бомбардировщика Боинга B-52, поскольку создаётся эффект полёта — начинаете пить прохладный сладкий коктейль, который постепенно становится всё более горячим.Советы к рецепту
– — Существуют другие рецепты приготовления коктейля: все ингредиенты смешиваются в шейкере, а коктейль подаётся в бокале; ингредиенты смешиваются, а коктейль подаётся со льдом. Также есть вариант, в котором коктейль готовят аналогично рассмотренному, но не поджигают.
– — Если у Вас нет барной ложки, можете воспользоваться обычным столовым ножом, который нужно чуть наклонить над рюмкой и аккуратно наливать ликёры по плоскости его лезвия.
– — Эффект того, что ликёры не смешиваются, достигается за счёт их разного удельного веса.
– — Используйте рюмки или бокалы с толстыми стенками, чтобы они выдержали высокую температуру коктейля.
– — Не стоит злоупотреблять алкогольными напитками, даже такими вкусными, как этот.
Коктейль Б-52 рецепт с фото, как приготовить на Webspoon.ru
Алкогольный коктейль B-52
Коктейль Б-52 — популярный слоёный, алкогольный, десертный коктейль, сервируемый с пламенем. Он состоит из 3 очень разных по вкусу, прозрачности и цвету ликёров: малопрозрачного кофейного, непрозрачного сливочного и прозрачного горько-апельсинового. Так что Б 52 — это шедевр сочетания различных вкусов, цветов, фактур и температуры.
Международная барменская ассоциация относит его к напиткам новой эры, однако, я думаю, ему не хватает лишь «выслуги лет» для того, чтобы перейти в разряд незабываемой вневременной классики.
Как приготовить «Коктейль Б-52» пошагово с фото в домашних условиях
Шаг 1 Ссылка
Б-52 делается из 3 ликёров: кофейного (Кулуа), сливочного (Бейлис) и апельсинового (трипл-сек или куантро), взятых в равных долях. IBA рекомендует соотношение 20х20х20 мл. Но самое важное — это, собственно, какого размера огнеупорную стопку вам удастся найти, потому что коктейль придётся поджигать.
Шаг 2 Ссылка
Нижний слой — кофейный ликёр.
Шаг 3 Ссылка
Шаг 4 Ссылка
Верхний слой — апельсиновый. Но, поскольку подходящие ликёры имеют крепость 40% и ниже, при комнатной температуре они не горят. Следовательно, Куантро нужно подогреть. Для этого берём чуток больше ликёра, чем потребуется, и ставим на 15 секунд в микроволновку на высокой мощности.
Шаг 5 Ссылка
Вливаем последний слой, тоже по ложечке.
Шаг 6 Ссылка
Поджигаем ликёр в момент сервировки. Желательно сервировать его с длинной огнеупорной трубочкой. Обычные пластиковые плавятся, а при использовании коротких термостойких (есть такие) возникает риск опалить волосы. Б-52 пьют очень быстро.
Коктейль Б-52 — рецепт с фотографиями
Ингредиенты:
15 мл | 15 мл | ||
15 мл |
Описание рецепта — Коктейль Б-52:
Коктейль Б-52 — это три вкуса и три температуры, которые молниеносно сменяют друг друга. Сначала выпивается холодный кофейный ликер, который сразу же разбавляется теплым сладким сливочным, а затем букет дополняется разогретым цитрусовым Куантро. Калейдоскопическая смена вкусовых ощущений сделала этот коктейль одним из самых популярных в барах по всему миру.
Коктейль Б-52: состав, калорийность и пищевая ценность на 100 г
Углеводы 43,33 г Узнать большеБолее подробная информация о составе и калорийности блюд доступна в приложении Patee. Рецепты для iPhone, iPad и Android |
|
Шаг 1:
Для приготовления коктейля Б-52 нам понадобятся в равных пропорциях кофейный ликер Калуа, сливочный ликер Бейлис и апельсиновый Куантро.
Шаг 2:
Коктейль Б-52 состоит из трех слоев, которые не должны смешиваться друг с другом. На дно бокала шот наливаем первый слой — кофейный ликер Калуа.
Шаг 3:
Теперь будем использовать барную ложку. Ее можно заменить обычной ложкой с длинной ручкой или ножом. Медленно наливаем сливочный ликер Бейлис по ложке. Если исключить тряску и сильную струю, то два слоя не смешаются.
Шаг 4:
Как и в предыдущем шаге, с помощью барной ложки, медленно заполняем шот третьим слоем — апельсиновым Куантро.
Шаг 5:
Коктейль Б-52 можно пить в “холодном виде”, но для более впечатляющего зрительного и вкусового эффекта мы его подожжем. Горящий коктейль нужно выпивать сразу, поэтому поджигаем его перед подачей.
Шаг 6:
Коктейль Б-52 готов! Он пьется через соломинку, которую, чтобы она не расплавилась, нужно быстро опустить на самое дно шота и так же быстро выпить его содержимое.
Приятного аппетита!
Как сделать коктейль Б 52
Автор Леха Барменный На чтение 7 мин. Опубликовано
Приветствую тебя, дорогой друг! Сегодня поговорим о том, что такое коктейль Б 52 и как соблюдать рецепт при его приготовлении. Из данной статьи ты узнаешь:
- Историю коктейля B 52;
- Рецепт коктейля Б 52 в домашних условиях;
- Состав коктейля;
- Чем можно заменить основные ингредиенты в алкогольном коктейле B 52.
История легендарного коктейля
Ну что же, начнём с самого начала, так сказать, с истоков происхождения. История коктейля доподлинно неизвестна. На этот счёт существует несколько версий и каждая из них выглядит вполне правдоподобно.
- Одни полагают, что коктейль b 52 получил своё название в честь американского бомбардировщика «Боинг B-52 Stratofortress».
- Другие утверждают, что своё название напиток получил из-за популярной в 70-х годах американской рок-группы «The B-52s».
- Есть ещё мнение, что коктейль своим названием обязан женской причёске, которая была модной в 60-х годах, она имела похожее название.
- И кстати, бытует версия, что этот шот придумали в барах Малибу в 1955 году.
Как бы то ни было, в наши дни мы имеем сладковатого вкуса алкогольный коктейль, выполненный из трёх ликёров, налитых слоями:
- Апельсиновый;
- Сливочный;
- Кофейный.
Как сделать коктейль Б 52 в домашних условиях — 3 рецепта
Теперь перейдём к самому сладенькому и посмотрим, как приготовить это напиток в домашних условиях. К тому же посмотрим, какие варианты приготовления существуют, которые ты сможешь намутить у себя на кухне.
Все три ингредиента для того, чтобы сделать коктейльКлассический коктейль Б 52 — Состав и рецепт
Первым делом рассмотрим самый популярный, он же классический рецепт напитка, который не составит труда сделать на любой тусовочке.
Состав:
- Кофейный ликёр Калуа – 20 мл;
- Сливочный ликёр Baileys Irish Cream – 20 мл;
- Апельсиновый ликёр Куантро – 20 мл.
Так выглядит подожжённый вариантДополнительно! Если стопка небольшая, то лучше наливать по 15 мл каждого ингредиента.
Рецепт классического Б-52
Основная проблема, с которой сталкиваются те, кто впервые делают Б-эшку, это налить ингредиенты, так, чтобы они легли слоями и не смешались. Честно скажу, когда начинал работать бариком, далеко не с первого раза получилось, постоянно слои получались «рваными».
И так, давай начнём, берёшь шот в одну руку, в другую барную ложку (если таковой нет, то и чайная подойдёт) и:
- Упираешь ложку в стенку шота и медленно наливаешь кофейный ликёр.
- Аналогично упираешься ложкой и заливаешь сливочный ликёр.
- И напоследок, добавляешь апельсиновый.
Конечно, финальной ноткой будет поджигание верхнего слоя коктейля в рюмке. Но если ты поджёг напиток, то пить нужно только через трубочку. Почему так? Расскажу тебе подробнее в этой статье, но чуть позже.
Суть заключается в том, что первым делом заливается в стопку самый густой ликёр (кофейный), чтобы лучше держать на себе остальные составляющие. Потом добавляется сливочный, он чуть менее густой, а последний добавляется апельсиновый.
Холодный B 52 — Состав и рецепт
Если ты впервые встречаешь подобное название b 52, то не бойся, готовиться он точно также, как и классический вариант.
В состав входят всё те же:
- Калуа – 20 мл;
- Бейлиз – 20 мл;
- Куантро – 20 мл.
Только в случае холодного B 52 в конце его не нужно поджигать, и лучше всего, заранее охладить все напитки примерно до 15 градусов.
Ещё вариант холодного B 52 – забросить в стакан лёд и добавить каждый из ингредиентов, а потом всё перемешать. Видел только один раз, чтобы так пили, но как по мне, это полная порнография.
Классический вариант коктейля без поджигания ликёраЖенский коктейль Б 52 — Состав и рецепт
Возможно ты уже знаешь, что разновидностей коктейля придумали уже массу. Вот и для прекрасной половины населения имеется отличный вариант. Такую штуку можешь приготовить своей девушке, если хочешь добавить свежих ноток в ваши весёлые вечера.
Состав:
- Шоколадный ликёр Шеридан – 20 мл;
- Бейлиз – 20 мл;
- Куантро – 20 мл.
Рецепт женского варианта Б-эшки отличается только одним ингредиентов, кофейный ликёр меняется на шоколадный.
Способ приготовления не меняется, все три напитка выкладываешь слоями в стопку и в конце поджигаешь, или не поджигаешь, в зависимости от предпочтений твоей дамы.
Так же от себя добавлю, что женский вариант очень классный, сам пробовал и как показывает личная практика, заходит он очень приятно, особенно в те моменты, когда хочется сладенького.
B 52 в котором используется шоколадный ликёр вместо кофейногоПростой рецепт — Тонкости приготовления
Хочу поделиться с тобой некоторыми тонкостями касательно коктейля 52, чтобы каждый раз у тебя получались красивые слои.
Во-первых, тебе нужно заранее охладить все напитки до 10-15 градусов, поскольку именно холодные ликёры лучше укладываются слоями.
Во-вторых, по традиции соотношение алкоголя в B 52 1:1:1, грубо говоря, пропорции должны быть одинаковые на каждый ликёр.
В-третьих, не рекомендую за один вечер выпивать более 4 шотов в одно лицо. Поскольку коктейль достаточно крепкий и быстро укладывает на лопатки. Если нужно догнаться или разогнаться в начале вечеринки, то B 52 отличный вариант.
Как наливать ликёры, чтобы они ожились слоямиКак правильно пить коктейль B 52
Если коктейль не поджигать, то пить его нужно залпом, то есть одним глотком.
Если ты всё же решил поджечь, то обязательно через соломинку и главное запомни, что соломинку нужно вставлять до самого дна и очень быстро, иначе огонь её расплавит и ничего у тебя не выйдет.
Первым делом ты почувствуешь холод нижнего слоя. Постепенно тепло коктейля будет увеличиваться и подожжённый ликёр сделает коктейль б 52 горячив в конце.
Один из вариантов, чем лучше поджечь коктейль — спичкаСколько градусов в коктейле Б 52
В классическом коктейле B 52 – 28 градуса, если соблюдать все пропорции и не изменять ингредиенты напитка.
Но как говорилось ранее, в наши дни придумали множество вариаций Б-эшки. Некоторые компоненты меняются, от чего изменяется и крепость.
К примеру, Б-55, в состав которого входит абсент Xenta Absenta вместо апельсинового ликера, содержит в себе в районе 70 градусов.
Если взять другие коктейли, то Пина Колада содержит в себе 20 градусов. А Космополитен — 16 градусов. То есть видно, что Б-52 является довольно крепким напитком с высоким градусов.
Три слоя коктейля Б в стопкахЧем можно заменить основные составляющие коктейля Б 52
Раз уж мы говорим о приготовлении коктейля B-52 в домашних условиях, то есть смысл разобраться в том, какие ликёры можно заменить на похожие аналоги, если в магазине не продаются классические составляющие.
И так, если у тебя нет Бейлиза, то вместо него отличным вариантом станет Айриш Крим.
Далее, если не удалось раздобыть апельсиновый ликёр Куантро, то заменителем становится Гранд Марнье или обычный Трипл Сек.
Калуа можно смело отбросить в сторону и заменить его на ром Капитан Блэк с привкусом кофе. Опять же, можешь его заменить и на шоколадный ликёр, получается чуть слаще, но всё равно пить приятно.
И на последок, я считаю, что есть смысл поговорить о различных разновидностях B52. Каждый вариант с похожей заменой основного состава в стопке:
- B 51 – Куантро меняется на ореховый ликёр Frangelico;
- B 52 с полной загрузкой – в нём также апельсиновый ликёр меняется на ореховый, а кофейный на ром Бакарди;
- Б 53 – Бейлиз меняется на анисовый ликёр или проще говоря на Самбуку;
- Б 54 – Куантро заменить на Амаретто – миндальный ликёр;
- B 55 – Cointreau меняется на абсент Xenta Absent;
- B 57 – Бейлиз убираем, а вместо него добавляем мятный шнапс.
Мнение о напитке
Коктейль B 52 – крепкий шот, но очень вкусный и достаточно прост в приготовлении. Сделать его можно во многих вариациях, что позволит разбавить вкусовые оттенки любой посиделки. Все рекомендую попробовать. Но не забывайте, что B 52 стоит пить не более 3-4 шотов.
Из этих алкогольный напитков можно сделать B 52 домаприготовление, история, как его пить
Знаменитый коктейль Б-52 является неотъемлемым атрибутом клубной жизни и веселых молодежных вечеринок. Он подается во всех уважающих себя барах мира и представляет собой напиток с приятным сладковатым вкусом. Традиционно состоит трех слоев ликеров в равном количестве (кофейный, сливочный и апельсиновый). Главная «фишка» коктейля Б-52 заключается в том, что перед употреблением его поджигают. Но можно обойтись и без этого, поскольку выпить пылающую смесь без тренировки не так просто.
Приготовление традиционного Б-52Коктейль можно приготовить самостоятельно. Состав и пропорции напитка:
- кофейный ликер (Captain Black, Kahl?a) – 15 миллилитров;
- сливочный ликер (Brogans, Baileys, Sheridans) – 15 миллилитров;
- апельсиновый ликер (Grand Marnier, Cointreau) – 15 миллилитров.
Можно наливать и другое количество миллилитров, но международной классификацией предусмотрена именно такая пропорция.
Приготовление:
Основная сложность состоит в получении равномерных, не смешивающихся друг с другом слоев. Для этого действовать нужно следующим образом:
- Налить в подходящую по объему стопку кофейный ликер.
- По тыльной стороне ложки или лезвию ножа медленно влить поверх кофейного ликера сливочный.
- Точно таким же способом налить апельсиновый ликер.
- Вставить соломинку (необязательно) и поджечь коктейль.
Вариации
Помимо традиционной версии напитка, существуют его разновидности:
- в барах индийского Мумбаи апельсиновый ликер заменен бомбейским джином;
- в мексиканском варианте коктейля, названном «Б-52 в пустыне», вместо сливочного ликера наливают серебряную текилу;
- «Б-52 с полным боезарядом» (with a full payload) представляет из себя пятиступенчатый коктейль: к трем традиционным слоям добавляют еще два: ликер Frangelico и ром Bacardi.
Если в коктейль вставлена соломка, то выпивать его следует немедленно, пока пластмасса не начала оплавляться. Пьющий сначала ощущает холод нижнего слоя, затем тепло среднего, а в конце напиток вовсе становится горячим. Эффект очень необычный, многие сравнивают его с взлётом.
Если трубочка не используется, то коктейль следует просто выпить залпом. Лишь бы не цедить его по глоточку. В любом случае эйфория от Б-52 будет обеспечена, особенно если он выпивается впервые. Главное – не злоупотреблять, поскольку сильное опьянение может наступить уже после 3-4 порций. И, по наблюдениям барменов, быстрее всего приходит оно при употреблении коктейля через соломинку.
В некоторых странах Б-52 не делают слоистым. Просто смешивают все ингредиенты в любой последовательности и добавляют лед. Естественно, ни о каком поджигании напитка в этом случае мечтать не приходится.
Существует четыре версии происхождения коктейля «Б-52»:
- Самая древняя из легенд утверждает, что коктейль был создан во время Второй мировой войны расквартированными в Италии американскими летчиками, но она не объясняет появление подобного названия.
- Наиболее правдоподобная версия: рецепт коктейля придумали в 1955 году в питейном заведении «Alice» калифорнийского Малибу и назвали в честь стратегического бомбардировщика Боинг-52 (Б-52) Stratofortress, только что принятого на вооружение военно-воздушными силами армии США.
- Коктейль впервые приготовили в 1977 году в ресторане «Keg’s steakhouse» или баре гостиницы «Banff Springs Hotel» (оба объекта находятся в канадской провинции Альберта) и назвали в честь созданной годом раньше популярной американской рок-группы «The B-52s».
- Самая экзотическая версия: напиток позаимствовал название у модных в 1960-е годы женских причёсок, которые сами, в свою очередь, были названы в честь бомбардировщика Б-52.
Б-52 Рецепт Коктейля + Фото и Видео
* Используйте простой рецепт коктейля Б-52, чтобы приготовить свой уникальный микс в домашних условиях. Для этого достаточно заменить базовый алкоголь на тот, который есть в наличии.
Б-52 видео-рецепт
История коктейля Б-52
Существует минимум 2 основные теории, которые немного проливают свет на происхождение коктейля Б-52.
Первая и, пожалуй, самая близкая к правде теория утверждает, что коктейль был создан в честь бомбардировщика «US B-52 Stratofortress», откуда и пошло оригинальное название коктейля.
Основным оружием бомбардировщика были зажигательные бомбы. Считается, что именно поэтому появилась «пламенная» версия Б-52.
Другая теория утверждает, что коктейль был создан Питером Фичем, главным барменом отеля Банф-Спрингс в городе Банф, Альберта (Канада).
Интересным является тот факт, что Питер называл все свои коктейли в честь любимых музыкальных групп, альбомов и песен.
Однако, широкое распространение коктейль получил благодаря одному из клиентов Питера, который в те времена скупал различные рестораны в Альберта.
Ему настолько понравился Б-52, что он решил популяризировать его через свою сеть ресторанов. Вот почему считается, что впервые шот Б-52 появился в «Keg Steakhouse» в 1977 году.
В 2009 году коктейль Б-52 стал любимым напитком в Северном Лондоне; в то время нападающий игрок «ФК Арсенал» Никлас Бендтнер сменил номер на своей футболке с 26 на 52, заслужив, таким образом, прозвище «B52».
После того, как Никлас забил победный гол в матче с «ФК Ливерпуль», все бары «взорвались» от наплыва желающих выпить одноименный шот.
Вариации коктейля Б-52
B-51 – с ликером лесной орех вместо калуа.
B-52 Bomb Bay Doors – с джином бомбей сапфир.
B-52 in the Desert – с текилой вместо бейлиса.
B-53 – с самбукой вместо бейлиса.
B-54 – с амаретто вместо калуа.
B-55 – с абсентом вместо калуа, также известен как B-52 Gunship.
B-57 – с мятным шнапсом вместо бейлиса.
Как правильно по рецепту сделать дома алкогольный коктейль Б-52?
Название относится к стратегическому бомбардировщику США времён холодной войны. Этот бомбардировщик использовался во время войны во Вьетнаме для сбрасывания зажигательных бомб, которые и вдохновили назвать коктейль.
Место первого приготовления, где был придуман рецепт коктейля Б-52, является неизвестным.
Содержание материала
История Коктейля B-52
Одни говорят Б 52 был создан в знаменитом ресторане Элис в Малибу, Калифорния. Другие говорят о заведении steakhouse в Калгари, Канада. Будто бы в 1977 году в этом заведении впервые он был смешан в современных пропорциях. Большинство же склоняются к коктейлю из Малибу, штат Калифорния, так как в нём содержался Grand Marnier для поджигания.
А также коктейль Б 52, входит в категорию зажигательных, то есть высокая концентрация спиртов позволяет поджечь его. Как и бомбардировщик, с которым связано его имя, этот коктейль явно может взорвать атмосферу. Б 52 — это многослойный коктейль, крепкий, и легко узнаваемый, когда дело доходит до дегустации.
Как сказано выше, напиток Б 52 назван именем бомбардировщика, который был использован во время войны во Вьетнаме, выполняя задания, очень хорошо подходил для сбрасывания стратегических зажигательных бомб, отсюда и горящий вариант этого коктейля. Как и многие другие напитки и коктейли, всем знакомый Б 52 имеет благородное происхождение, так что, можно сказать, что его популярность вдохновила барменов на другие вариации коктейлей. Играя слоями, можно изменять крепость этого напитка, используя различные плотности при комбинировании ингредиентов. Хотя требуются специальные комбайны для создания точного рецепта, большинство барменов точно знают, как приготовить Б52.
Также рекомендуем прочитать:
Существует два вида Б 52
- Слоёный.
- Смешанный.
Первый относится к созданию горизонтальных слоёв, в то время как второй смешивается блендером или миксером. При создании слоёв ингредиенты рекомендуется выливать в стакан по наклонной ложечке, а затем подавать с трубочкой. Подаётся коктейль в бокалах шутер или шотах.
Классический рецепт Б 52
Состав коктейля Б 52
- 2 cl (1 часть) кофейный ликёр Kahlúa;
- 2 cl (1 часть) ликёр Baileys Original Irish Cream;
- 2 cl (1 часть) ликёр Grand Marnier или ликёр Cointreau.
Основные ингридиенты классического рецепта.
Название ликёр происходит от латинского слова, которое означает расплавить или растворить. Ароматические вещества, используемые, чтобы сделать ликёр, растворяются в алкогольном напитке. Ликёр может быть настоян на различных видах фруктов, трав, специй, цветов, семян, орехов, корней, коры, яиц и сливок. Ликёры иногда называют настойками, и это вызывает некоторое недоумение. Ведь для простого обывателя, настойка — это лекарство.
Ликёры — это сладкие алкогольные напитки, приправленные множеством различных ингредиентов, которые подходят к употреблению как в коктейлях, так и в одиночном виде. Содержание алкоголя в ликёрах, как правило, не является отличительной чертой этих фирменных напитков.
Ликёры производятся практически во всех странах мира имеют различные ароматы и цвета. Большинство ликёров имеют низкое содержание алкоголя примерно 15—30%, хотя некоторые обладают гораздо более высоким содержанием спирта до 55%.
Kahlúa — мексиканский кофейный ликёр. Во время горения, даёт напитку нежный аромат кофе и шоколада.
Baileys Original Irish Cream ирландский ликёр, в основе которого ирландский виски и сливки, созданные на винокурне Gilbeys в северной Ирландии, является первым ирландский кремовым ликёром на рынке. Его можно употреблять как отдельный напиток или же он может представлять собой ингредиент многих коктейлей, например, в Б 52.
Grand Marnier — это ещё один ликёр, на этот раз из купажированного сорта коньяков и апельсиновой настойки. Его можно подавать в качестве отдельного напитка или использовать в большом разнообразии коктейлей, таких как Космополит, Гранд Мимоза, Grand Marnier, Маргарита и. В напитке Б 52 это верхний слой. Он служит воспламеняющим средством. Grand Marnier нужно сначала подогреть, так как он не воспламеняется при комнатной температуре.
Коктейль Б52 оказался настолько вдохновляющим для некоторых людей, что стали появляться другие варианты. В состав стали добавлять новые ингридиенты или заменять старые. Например, коктейль отличается от традиционного рецепта добавлением джина bombay, то время как другой коктейль, называется desert, в нём Baileys Original Irish Cream заменяют текилой. Если вы задумались как пить Б 52 в домашних условиях, то готовить лучше по классическому рецепту.
Существует Б52 с большей концентрацией алкоголя. Состоит из кофейного и кремового ликёра, а также рома вместо апельсинового ликёра. Версия усиленного Б52, который популярен сегодня в мужских компаниях, сначала поджигается. Потом Б52 нужно быстро выпить. Б 52-это идеальный напиток, чтобы насладиться встречей с лучшими друзьями и выпить за прекрасный вечер.
В баре SHATLER при поджигании Б 52 происходит настоящий фейерверк, на что подожжённый напиток отвечает восхитительным ароматом кофе с ликёром и ромом, а также включает в себя нотки шоколада и какао.
Главные секреты приготовления Б-52
Прежде чем готовить и пить Б-52 в домашних условиях, вы спросите сколько градусов в б 52?
Этот славный напиток содержит 29.9% алкоголя в объёме. Что делает любой коктейль Б 52 украшением любого вечера в компании. Б52 очень универсальный напиток и может быть подан в трёх вариациях:
- После ужина, обычно подаётся при комнатной температуре.
- В течение дня, охлаждённым, с кубиками льда.
- Горящим, на самой жаркой вечеринке.
Спецэффекты при приготовлении Б52
Никогда не задумывались, как бармены создают необычный эффект радуги для приготовления коктейлей? Они используют метод, называемый «плавающие ликёры», который достигается за счёт медленного добавления ликёра, вливая его постепенно по перевёрнутой ложке. Это создаёт эффект радуги в стакане при использовании различных цветных ликёров или наливок.
Следующие советы помогут вам сделать подачу Б-52 более эффектной.
Погрузите ободок стопки в лимонный сок, а потом в сахар. Вкус получится очень необычным и новым. Простой, но эффективный способ добавить в ваш коктейль изюминку!
Очень важна презентация классического Б52! Добавьте красочные украшения — мяту, зонтики, соломинку, бумажные цветы и даже бенгальские огни! Эти украшения стоят дешёво и их легко найти в магазине. Добавить колотый лёд — просто поместите кубики льда в пластиковый пакет и раздавите лёд с тяжёлым предметом. Используйте ломтики фруктов для украшения и добавьте зелень в классический Б52.
Если вы не знаете, как сделать Б52 в правильных пропорциях, вы можете использовать напёрсток, чашку или даже кувшин (если вы делаете коктейль для компании).
hACE2 Fc-нейтрализующий коктейль антител обеспечивает синергетическую защиту от SARS-CoV-2 и его спайковых вариантов RBD
Пандемия COVID-19, вызванная новым коронавирусом SARS-CoV-2, стала глобальным кризисом общественного здравоохранения, и срочно необходимы эффективные профилактические и терапевтические средства. Ангиотензин-превращающий фермент 2 (ACE2), карбоксипептидаза, разлагающая ангиотензин II до ангиотензина 1–7, был идентифицирован как рецептор хозяина для взаимодействия с гликопротеином SARS-CoV-2 spike (S) во время проникновения вируса 1 .Таким образом, ACE2 стал важной мишенью для разработки лекарств от COVID-19. Человеческий рекомбинантный растворимый ACE2 (hACE2) показал значительное ингибирование инфекции SARS-CoV-2 в клеточных культурах и сконструированных органоидах 2 . Он прошел клинические испытания фазы I и фазы II и показал хороший профиль безопасности 3 . В недавнем отчете о клиническом случае лечение hACE2 у пациента с тяжелой формой COVID-19 продемонстрировало быстрый клиренс вируса в плазме и дыхательной системе 3 . Кроме того, нейтрализующие антитела (NAb), непосредственно нацеленные на взаимодействие между ACE2 и рецептор-связывающим доменом (RBD) белка S, также показали многообещающие терапевтические эффекты в клинике, и два из них получили одобрение FDA EUA 4,5,6 .Однако сообщалось о множественных мутациях в S-белке 4,7,8,9 , которые могут вывести из строя существующие NAb в качестве терапевтических агентов. Чтобы преодолеть ускользание вирусных мутантов и уменьшить лекарственную устойчивость конкретного NAb, используется комбинированная стратегия, в которой используется коктейль из двух или более NAb 4,6 . Но такой подход не только дорогостоящий, но и не может гарантировать защиту от всех мутаций. В этом исследовании мы использовали другую стратегию: слияние растворимого внеклеточного домена hACE2 с Fc-областью человеческого IgG1, названной HLX71, которая в принципе должна быть способна нейтрализовать любые вирусные мутанты, способные связываться с ACE2.Мы дополнительно исследовали активность HLX71 и его комбинации с HLX70, терапевтическим NAb (описанным в нашем предыдущем исследовании 10 ) против мутантных псевдовирусов SARS-CoV-2, живого вируса SARS-CoV-2 in vitro и in vivo. Наши данные продемонстрировали, что коктейль из слитого белка HLX70 NAb и HLX71 вызывал синергию противовирусной активности и демонстрировал более широкий охват вариантов RBD.
Высокая скорость клиренса и короткий период полувыведения делают растворимый hACE2 маловероятным терапевтическим средством 3,11 .hACE2 со слиянием Fc человеческого IgG1 на С-конце продемонстрировал улучшенные фармакокинетические свойства и был способен связываться с белками SARS-CoV и SARS-CoV-2 S и нейтрализовать псевдовирусы in vitro 12 . Для дальнейшей оценки его терапевтического потенциала мы создали гибридный белок HLX71, hACE2-Fc. Результаты ELISA показали, что HLX71 связывается с SARS-CoV-2 RBD с высокой аффинностью (EC 50 = 0,14 нМ) (дополнительный рисунок S1a). HLX71 также может блокировать связывание белка RBD с рекомбинантным белком ACE2 или клетками HEK293T, временно экспрессирующими hACE2, с IC 50 из 2.56 нМ и 9,8 нМ соответственно (дополнительный рис. S1b, c). Более того, HLX71 эффективно нейтрализовал псевдовирус SARS-CoV-2 с IC 50 , равный 5,56 мкг / мл (17,4 нМ), и штамм живого вируса BetaCoV / Beijing / IMEBJ01 / 2020 с помощью PRNT 50 (тест нейтрализации уменьшения бляшек на 50%). ) 1,74 мкг / мл (7,83 нМ) (дополнительный рисунок S1d, e). Важно отметить, что слитый белок оставался эффективным в нейтрализации варианта вируса D614G, одной из наиболее распространенных мутаций (12,3 нМ) (дополнительный рис.S1e). Таким образом, HLX71 может эффективно блокировать связывание SARS-CoV-2 с ACE2 и нейтрализовать как псевдовирус SARS-CoV-2, так и инфицирование живым вирусом.
Затем мы попытались оценить эффективность HLX71 in vivo у мышей, трансгенных по hACE2. Однократная доза HLX71 в дозе 15 или 50 мг / кг вводилась внутрибрюшинно через 2 часа после интраназального инфицирования SARS-CoV-2 (рис. 1а). Летальная доза (nCoV-SH01, 4,15 × 10 5 БОЕ) вызвала клинические симптомы инфекции у всех животных. В то время как 60% контрольных hACE2-трансгенных мышей умерли до запланированной эвтаназии, все животные, получавшие HLX71 в дозе 50 мг / кг, выжили (рис.1b), что свидетельствует о противовирусной активности HLX71 in vivo.
Рис. 1. Комбинация HLX70 и HLX71 повысила эффективность нейтрализации SARS-CoV-2.a Схематическая диаграмма схемы лечения HLX71 в модели трансгенных мышей hACE2. Однократная доза HLX71 (15 или 50 мг / кг) или контрольный PBS вводилась внутрибрюшинно через 2 часа после заражения SARS-CoV-2. Смертность мышей регистрировали ежедневно в течение 5 дней. b Кривая выживаемости мышей, инфицированных SARS-CoV-2, обработанных HLX71.* P <0,05. c Аффинный анализ связывания HLX70 (слева) и HLX71 (справа) с SARS-CoV-2 RBD. d Активность HLX71 по блокированию RBD усиливается HLX70. HLX70 (0,05 мкг / мл) смешивали с серийно разведенным HLX71 и инкубировали с RBD-His. Затем смесь добавляли к суспензии клеток 293T-hACE2, и для обнаружения использовали антитело против His-PE. Значения CI (индекс комбинации) рассчитывали с помощью программного обеспечения CompuSyn. e Активность HLX70 по блокированию RBD усиливается HLX71.HLX71 (0,5 мкг / мл) смешивали с серийно разведенным HLX70 и инкубировали с RBD-His. Скорость блокировки измерялась так же, как d . f HLX70 смешивали с HLX71 в соотношении 1: 2, 1: 3, 1: 5, 1:10 и 1:30. Трехкратные серийные разведения смесей добавляли к ~ 500 БОЕ раствора вируса SARS-CoV-2, и эффективность нейтрализации оценивали в клетках Vero с использованием PRNT. На оси x показаны концентрации HLX70. г Эффективность комбинации HLX70 + HLX71 in vivo.Мышей BALB / c лечили HLX70 ( n = 5), HLX71 ( n = 5) или комбинацией HLX70 + HLX71 ( n = 5) через 2 часа после заражения 1,6 × 10 4 БОЕ MASCp6. Через пять дней после заражения вирусом мышей умерщвляли для анализа вирусной нагрузки в легких и трахее. Титр вируса выражали как количество копий РНК на грамм ткани. нс, не имеет значения; * P <0,05. ч. Активность нейтрализации HLX71 против HLX70-устойчивых мутантов псевдовируса SARS-CoV-2. i Нейтрализационная активность HLX70 и HLX71 против псевдовирусов с множественными мутациями.
Хотя HLX71 нацелен на консервативные остатки, критические для связывания ACE2-RBD, комбинация HLX71 и NAb может быть более эффективной для достижения более широкого охвата мутантов. Здесь мы выбрали P17 (кодовое название HLX70), NAb с сильной нейтрализующей способностью в нашем предыдущем исследовании 10 , в качестве комбинационного партнера. Хотя константа равновесия ( K D ) сравнима, HLX70 демонстрировал отличную от HLX71 кинетику связывания с 6.В 5 раз более медленная скорость ассоциации ( k a ) и в 18,7 раз более низкая скорость диссоциации ( k d ) (рис. 1c), предполагая другой способ распознавания по отношению к RBD.
Эффект блокирования связывания белка RBD с клетками hACE2-HEK293T оценивали с помощью анализа на основе проточной цитометрии. Серийно разведенный HLX71 смешивали с фиксированной низкой концентрацией HLX70 (0,05 мкг / мл). При этой концентрации HLX70 не показал блокады RBD. Напротив, лечение HLX71 в повышенных концентрациях вызывало дозозависимые противовирусные эффекты с IC50, равным 9.3 нМ (рис. 1г, черная линия). Примечательно, что HLX71 плюс неэффективная доза HLX70 (0,05 мкг / мл) значительно увеличивали активность блокирования RBD по сравнению с монотерапией HLX71 с IC50, равным 4,3 нМ (рис. 1d, красная линия). Напротив, HLX71 также может усиливать активность HLX70. Как показано на фиг. 1d, слитый белок HLX71 в концентрации 0,5 мкг / мл не вызывал активности блокирования RBD. В то время как HLX70 вызывал дозозависимую активность по блокированию RBD с IC50 1,8 нМ (рис.1e, синяя линия), HLX70 плюс неэффективная доза HLX71 (0.5 мкг / мл) сдвинул кривую доза-ответ влево с IC50, равным 0,9 нМ (рис. 1e, красная линия). Эти результаты вместе предполагают, что комбинация HLX71 с HLX70 может синергетически блокировать связывание RBD с hACE2 на HEK293T.
Чтобы определить, был ли синергетический противовирусный эффект HLX71 и HLX70, был проведен стандартный тест нейтрализации уменьшения бляшек (PRNT) для исследования эффективности комбинационной нейтрализации против заражения живым вирусом SARS-CoV-2.Смеси HLX70 и HLX71 в соотношении 1: 2, 1: 3 или 1: 5 серийно разбавляли для оценки нейтрализующей активности SARS-CoV-2 (500 БОЕ) в клетках Vero. Комбинация HLX70 и HLX71 с соотношением 1: 5 была примерно в три раза более мощной, чем один HLX70 (рис. 1f, слева). Мы повторили анализ нейтрализации с более высокими соотношениями HLX70 и HLX71 (1: 5, 1:10, 1:30), обнаружив, что идеальное соотношение комбинаций оставалось равным 1: 5 (рис. 1f, справа).
Появление новых мутантов SARS-CoV-2 значительно поставило под угрозу эффективность лечения COVID-19 8,9 .Таким образом, крайне необходимо разработать методы лечения, которые могли бы уменьшить утечку вируса. Сначала мы оценили эффективность комбинации HLX70 + HLX71 in vivo на модели на основе штамма MASCp6, адаптированного к мышам. MASCp6 содержал единственную мутацию N501Y в S-белке 13 , которая, как предполагалось, усиливала аффинность связывания с ACE2 мыши и человека 13,14 . По сравнению с только HLX70 или HLX71, 5 мг / кг HLX70 плюс 25 мг / кг комбинации HLX71 могут значительно повысить клиренс вируса, что свидетельствует об эффективности комбинированной терапии для нового идентифицированного варианта N501Y (рис.1г). Чтобы дополнительно оценить комбинационные эффекты HLX70 и HLX71 против более широкой панели вариантов RBD, мы смешали HLX70 и HLX71 в соотношении 1: 5 и выполнили тест нейтрализации с использованием псевдовирусной системы. Мы оценили 45 вариантов S, встречающихся в природе, и только некоторые из них (V483A, E484K, G485D, F490L, F490, P.1, B.1.526-1, B.1.617 и 501Y.V2-1) показали устойчивость к HLX70. (Рис. 1h, i и дополнительная таблица S1), о которых сообщалось как о критических остатках в интерфейсе связывания HLX70 / RBD 10 .Интересно, что HLX71 отдельно или в комбинации с HLX70 может эффективно нейтрализовать все 45 мутантов, включая варианты, устойчивые к HLX70, и широко распространенные мутанты (N501Y, P.1, B.1.1.7, B.1.429, B.1.526-1, B .1.617 и 501Y.V2-1) (рис. 1i). Эти результаты подтвердили нашу гипотезу о том, что HLX71 имеет более широкий охват, а комбинация HLX71 с HLX70 вызывает синергетический эффект против вирусной инфекции.
В этом исследовании мы продемонстрировали нейтрализующую активность HLX71 и его комбинации с HLX70, показав, что HLX70 и HLX71 работают синергетически при очень низких концентрациях в нейтрализации SARS-CoV-2 и демонстрируют более широкий охват наиболее известных вирусных вариантов. , включая несколько встречающихся в природе мутантов, устойчивых только к HLX70.Комбинация также показала улучшенный клиренс вируса N501Y in vivo.
HLX70, производный от семейства Vh4-30 / VK1-39 и распознающий как «вверх», так и «вниз» состояния RBD 10 , может быть отнесен к NAb класса 2 согласно структурному анализу Barnes et al. . 15 . Помимо HLX70 NAb, другие NAb класса 2 со сходными связывающими эпитопами, такие как BD-368-2, который проходит клинические испытания 6 , будут обладать комбинационным потенциалом с HLX71. Дальнейший структурный анализ показал, что два других класса NAbs (класс 3: S309 и класс 4: CR3022) нацелены на разные области 15 и могут также иметь функции в комбинационной паре с hACE2-Fc (дополнительный рис.S2), который требует дальнейшего изучения.
Помимо того, что он является рецептором для SARS-CoV-2, ACE2 также служит регулятором RAS и защищает органы от воспаления, вызванного Ang II 3 . HLX71 содержит внеклеточный домен человеческого ACE2 (UniProt: Q9BYF1), слитый с человеческим IgG1 Fc. Таким образом, как и ACE2, HLX71 обладает врожденной ферментативной активностью, что вызывает потенциальную озабоченность по поводу побочных эффектов. Однако в недавнем отчете о случае лечение hACE2 не только уменьшало вирусную нагрузку в плазме и дыхательной системе, но также приводило к заметному снижению Ang II и других маркеров воспаления и повреждения 3 , защищая дыхательную систему пациента.Кроме того, лечение HLX71 в разовой дозе до 150 мг / кг не вызывало каких-либо побочных эффектов, в том числе сердечно-сосудистых аномалий у яванских макак. Последующие передачи сигналов и Ang II-опосредованные эффекты могут быть исследованы во время моно- или комбинированной терапии, направленной на ACE2. Взятые вместе, вполне вероятно, что стратегия hACE2-Fc и HLX71 могут быть использованы для комбинированной терапии против COVID-19, а также против воспаления, вызванного Ang II.
Список литературы
- 1.
Hoffmann, M. et al. Вход в клетки SARS-CoV-2 зависит от ACE2 и TMPRSS2 и блокируется клинически доказанным ингибитором протеазы. Ячейка 181 , 271–280 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 2.
Monteil, V. et al. Ингибирование инфекций SARS-CoV-2 в тканях человека с использованием растворимого человеческого ACE2 клинического уровня. Ячейка 181 , 905–913 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 3.
Zoufaly, A. et al. Человеческий рекомбинантный растворимый ACE2 при тяжелой форме COVID-19. Ланцет Респир. Med. 8 , 1154–1158 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 4.
Baum, A. et al. Коктейль антител к белку шипа SARS-CoV-2 предотвращает быстрое ускользание от мутаций, наблюдаемое с отдельными антителами. Наука 369 , 1014–1018 (2020).
Артикул Google ученый
- 5.
Jones, B.E. et al. LY-CoV555, быстро выделяемое сильнодействующее нейтрализующее антитело, обеспечивает защиту на модели инфекции SARS-CoV-2 приматов, не относящихся к человеку. bioRxiv https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.09.30.318972v3 (2020).
- 6.
Du, S. et al. Структурно разрешенные антитела SARS-CoV-2 демонстрируют высокую эффективность у серьезно инфицированных хомяков и обеспечивают эффективную стратегию сочетания коктейлей. Ячейка 183 , 1013–1023 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 7.
Liu, Z. et al. Пейзажный анализ вариантов ускользания выявляет спайковые мутации SARS-CoV-2, которые ослабляют нейтрализацию моноклональных и сывороточных антител. bioRxiv https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.11.06.372037v1 (2020).
- 8.
Wibmer, C. K. et al. SARS-CoV-2 501Y.V2 ускользает от нейтрализации южноафриканской донорской плазмой COVID-19. Nat. Med. 27 , 622–625 (2021).
CAS Статья Google ученый
- 9.
Wang, P. et al. Устойчивость к антителам у SARS-CoV-2 вариантов B.1.351 и B.1.1.7. Природа 593 , 130–135 (2021).
CAS Статья Google ученый
- 10.
Yao, H. et al. Рациональная разработка коктейля человеческих антител, который выполняет несколько функций для защиты Pan-SARS-CoVs. Cell Res. 31 , 25–36 (2021 г.).
CAS Статья Google ученый
- 11.
Haschke, M. et al. Фармакокинетика и фармакодинамика рекомбинантного человеческого ангиотензин-превращающего фермента 2 у здоровых людей. Clin. Фармакокинет. 52 , 783–792 (2013).
CAS Статья Google ученый
- 12.
Lei, C. et al. Нейтрализация псевдотипированного вируса SARS-CoV-2 рекомбинантным ACE2-Ig. Nat. Commun. 11 , 1–5 (2020).
Google ученый
- 13.
Gu, H. et al. Адаптация SARS-CoV-2 у мышей BALB / c для тестирования эффективности вакцины. Наука 369 , 1603–1607 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 14.
Starr, T. N. et al. Глубокое мутационное сканирование домена связывания рецептора SARS-CoV-2 выявляет ограничения на сворачивание и связывание ACE2. Cell 182 , 1295–1310 (2020).
CAS Статья Google ученый
- 15.
Barnes, C.O. et al. Структуры нейтрализующих антител SARS-CoV-2 используются в терапевтических стратегиях. Природа 588 , 682–687 (2020).
CAS Статья Google ученый
Скачать ссылки
Благодарности
Это исследование было поддержано грантами Национального ключевого научно-исследовательского проекта Китая (2020YFC0848500) и Национального фонда естественных наук Китая (81861138013, 81501105, 31730034).
Информация об авторе
Заметки автораЭти авторы внесли одинаковый вклад: Цзюньли Лю, Ци Чен
Принадлежности
Shanghai Henlius Biotech, Inc., Шанхай, Китай
Джунли Лю, Шумин Ян, Ин Ли, Хунфань Ван, Вэй Гонг, Чжэньху Ли и Вейдун Цзян
Государственная ключевая лаборатория патогенов и биобезопасности, Пекинский институт микробиологии и эпидемиологии, AMMS, Пекин, Китай
Ци Чен, Юн-Цян Дэн и Ченг-Фэн Цинь
Школа фармацевтических наук, IDG / Институт исследования мозга Макговерна, Университет Цинхуа, Пекин, Китай
Ян Доу и Бай Лу
Vazyme Biotech Co., Ltd., Нанкин, Китай
Jinpeng Bi & Xiaoyu Xu
Sanyou Biopharmaceuticals Co., Ltd., Шанхай, Китай
Yongcong Tan & Guojun Lang
Больница Тяньтань в Пекине, Центр передовых инноваций человеческого мозга Защита, Столичный медицинский университет, Пекин, Китай
Бай Лу
Вклад
Эксперименты разработали JL, YL и WJ. Q.C., Y.-Q.D., Y.T., G.L. и C.-F.Q. разработали, провели и проанализировали эксперимент по нейтрализации живого вируса и эксперименты in vivo для проверки комбинационной эффективности HLX70 + HLX71.Y.D., S.Y., J.B., X.X. и B.L. разработали, провели и проанализировали эксперименты по нейтрализации псевдовирусов. H.W. и W.G. участвовали в производстве и производстве HLX70 и HLX71. J.L., S.Y., Y.D., Z.L., B.L. и W.J. написали и отредактировали рукопись.
Авторы, ответственные за переписку
Переписка на Бай Лу или Вэйдун Цзян.
Декларации этики
Конфликт интересов
Дж.L., S.Y., Y.L., H.W., W.G., Z.L. и W.J. являются сотрудниками Shanghai Henlius Biotech и заявляют, что у них нет других конфликтов интересов, которые могут иметь отношение к содержанию этой статьи. Остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Дополнительная информация
Примечание издателя Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и сведений об учреждениях.
Дополнительная информация
Права и разрешения
Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 Международная лицензия, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или в любом формате, при условии, что вы надлежащим образом укажете первоначального автора (авторов) и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете если были внесены изменения. Изображения или другие материалы третьих лиц в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законодательными актами или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя.Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.
Перепечатки и разрешения
Об этой статье
Цитируйте эту статью
Лю, Дж., Чен, К., Ян, С. et al. Комбинация антител, нейтрализующих Fc hACE2, обеспечивает синергетическую защиту от SARS-CoV-2 и его спайковых вариантов RBD. Cell Discov 7, 54 (2021). https://doi.org/10.1038/s41421-021-00293-y
Скачать цитату
Поделиться этой статьей
Все, с кем вы поделитесь следующей ссылкой, смогут прочитать это содержание:
Получить ссылкуИзвините, Ссылка для совместного использования в настоящее время недоступна для этой статьи.
Предоставлено инициативой по обмену контентом Springer Nature SharedIt
Коктейль с ингибитором фосфатазы (2 пробирки, 100X)
Цитаты на использование продукта
Подтверждение продукта покупателем (14)
Образцы ткани печени от мышей WT (W1, W2 и W3) и Hectd3 — / — (h2, h3 и h4) на 2-й день после заражения F .novicida и неинфицированных мышей WT (W) и Hectd3 — / — (H) гомогенизировали, а лизаты анализировали на активацию и экспрессию каспазы-3, каспазы-1, каспазы-11, ZBP1 и HECTD3 и фосфорилирование IκBα. , STAT1 и STAT3.GAPDH использовали в качестве контроля загрузки. Каждый символ обозначает отдельную мышь.
Уровни белков β-катенина и pGSK-3β, нормализованные до β-актина (40 кД) после 8 часов инкубации в клетках NTM после воздействия различных концентраций ODM и RPE EV. Общий белок экстрагировали из клеток NTM и анализировали вестерн-блоттингом.
Иммуноблот-анализ образцов печени мышей WT-Con (n = 2), WT-ETOH (n = 6) и Tg-ETOH (n = 6), подвергшихся хроническому (6 недель) этанолсодержащему протоколу диеты.Ингибиторы фосфатазы покупаются у Bimake (№ по каталогу B15001).
Уровни экспрессии EMT-ассоциированных маркеров в линиях клеток с избыточной экспрессией или нокдауном miR-616-3p определяли с помощью Вестерн-блоттинга. Ингибитор протеазы приобретается у Bimake.
Вестерн-блоттинг использовали для определения уровня белка регназы-1 в клетках NIh4T3, обработанных ингибитором BRD4 JQ1 и I-BET-762. Ингибитор протеазы (Bimake, № по каталогу B14001).
Вестерн-блоттинг оценивал уровни экспрессии AKT, p-AKTT308 и p-AKTS473 в клетках GBM, трансфицированных si-LINC00470.Смесь ингибиторов протеаз (Bimake, B14001) и коктейлей ингибиторов фосфатаз (Bimake, B15001).
Нокдаун SMYD2 siRNAs нарушает фосфорилирование SMAD1 / 5, индуцированное BMP2. Клетки HaCaT трансфицировали миРНК SMYD2 (siSMYD2-1 и 2). Два дня спустя клетки голодали по сыворотке в течение ночи и стимулировали BMP2 в течение 0, 15, 30 и 45 минут, как указано, и уровни SMAD5, фосфорилированного SMAD1 / 5 (SMAD1 / 5ph) и SMYD2 анализировали с помощью вестерн-блоттинга. GAPDH был показан как контроль загрузки.
Вестерн-блоттинг использовали для обнаружения экспрессии pY701-STAT1, STAT1, pY690-STAT2, STAT2 и FLAG-VP3 в клетках HEK293.
Коктейли Bimake лучше защищают фосфорилированные AKT и ERK, чем их конкурент.
Раствор 100X эффективен так же, как и таблетки Roche, в защите общего и фосфорилированного p38.
Коктейли Bimake позволяют обнаруживать фосфорилированный AKT через 7 часов иммуноосаждения.
Коктейли с ингибиторами бимаке работают лучше, чем их конкуренты!
Bimake позволяет обнаруживать фосфорилированный-AKT в течение 7 часов инкубации при комнатной температуре в 293 клетках.
Bimake позволяет обнаруживать фосфорилированный AKT в течение 16 часов инкубации при 4 градусах в 293 клетках.