Смак 1997: Смак (ОРТ, 1997) Группа «На-На»

Смак смотреть онлайн в хорошем качестве, фото, видео, описание выпусков

Одна из самых популярных и «долгоиграющих» кулинарных телепрограмм на российском телевидении, участие в которой принимают известные люди.

История программы Смак

Когда однажды на экранах телевизоров появилась реклама новой программы, меломаны всей страны впали в недоумение. Андрей Макаревич в роли кухарки? Не-е-ет… этого не может быть, потому что не может быть никогда. И поклонники русского рока в назначенный час прилипли к телевизорам в надежде, что кулинария — это только шутка, а на самом деле…

А на самом деле кулинария шуткой не оказалась; впрочем, сам Макаревич говорил впоследствии:

«Кухня — это лишь повод заманить известных людей в программу, чтобы пообщаться с ними в неформальной обстановке. Несерьезно думать, что к нам приходят поделиться рецептом».

Первым гостем был Александр Абдулов, готовили плов — в двух казанах,  из одного и того же набора продуктов, по одному рецепту, но… результат удивил всех, поскольку получилось два разных блюда.

Иван Ургант и программа Смак

Теперь уже трудно подсчитать — сколько человек приготовили свое хитрое или нехитрое блюдо на «смаковской» кухне, ведь «Смак» — программа-долгожитель, 15 лет в эфире!

14 января 2006 года Андрея Макаревича сменил Иван Ургант, и теперь звезды спорта, политики, искусства и культуры делятся своими фирменными рецептами под шутки нового ведущего. А первым гостем нового ведущего, кстати, стал сам  Макаревич и приготовил бараньи ребрышки.

«Смак — скорее не кулинарная передача, а развлекательная, — считает Иван Ургант. — А блюда здесь готовят достаточно простые. Когда мне говорят: неправильно вы приготовили, по-другому надо, — я отвечаю: это же готовят люди, которые ко мне приходят, а я всего лишь помогаю им чистить чеснок. А дома я очень люблю готовить, люблю, когда приходят гости и едят все, что я сделаю».

Новогодние выпуски программы Смак

24 декабря 2017 года, в канун католического Рождества, в студию к Ивану Урганту приехала певица Кристина Орбакайте. В рамках программы Кристина и Иван приготовили рождественскую индейку, нашпигованную айвой, и десерт с пряностями.

30 декабря 2017 года в программе приняла участие знаменитая певица, наставница в шоу «Голос» Пелагея. Вместе с Иваном она спела песню про елочку и приготовила совершенно не праздничное блюдо: суп из запеченных помидоров и бутерброды с сыром и авокадо.

Известный пианист Денис Мацуев, пришедший на программу 3 января 2018 года, приготовил сибирскую интерпретацию традиционного итальянского блюда — макароны по-таежному. Десертом стала шаньга с брусникой. Он поразил зрителей своим умением жонглировать тремя апельсинами.

4 января гостем «Смака» стал актер, музыкант, телеведущий и автогонщик Николай Фоменко. Он сначала в шутку пообещал приготовить свинину в майонезе, но затем все же рассказал рецепт вкусных тушеных макарон с томатами и базиликом, перцем чили и чесноком, и индейки, пожареной с луком-пореем.

Интересные факты о программе Смак

Программа «Смак» долго арендовала однокомнатную квартиру на улице Яблочкова. В ней жил продюсер Николай Билык. Спал на той самой кухне. Когда начиналась работа, он просто выкатывал кровать в прихожую.

• Долгое время зрителями программы были в основном сотрудники фирм-спонсоров и женщины из телекомпании «Смак», которым во время короткого перерыва надо было успеть помыть посуду и разложить на столе продукты.

• Андрей Макаревич редко знал, что за блюдо будет готовить пришедший кулинар. Когда герой передачи пытался рассказать о будущем «шедевре», Макаревич улыбался: «Только не сейчас! Вот включим камеру, а то мне дважды это слушать неинтересно».

  По окончании съемки первыми к кастрюльке подлетали операторы. Затем стол оккупировали зрители и «несчастные» звукорежиссеры, которым добираться к еде из другой комнаты было дольше всех. Еда испарялась за несколько мгновений.
• Однажды в субботу утром группа летела в Кению на съемки программы. Вместе с ними отправились Якубович и Ярмольник. В самолете один из пассажиров подбежал к Макаревичу и спросил: «А что, сегодня «Смака» не будет?» На что Якубович ответил: «И «Поля чудес» тоже!»
• Раймонд Паулс долго думал, что же ему приготовить в «Смаке», да так ничего и не изобрел. Буквально за день подруга жены продюсера программы предложила рецепт: креветки, отварные шампиньоны, зелень, майонез. Получился шикарный салат, вошедший в историю как салат Раймонда Паулса «Маэстро».

• Пришла как-то в «Смак» Алена Апина и собралась варить раков. До нее это уже с успехом делали Жигунов, Карцев, Лещенко с Винокуром… Но Апина заявила: «Будем готовить раков по-саратовски!» Поставила кастрюлю и давай туда: литр молока, литр кефира, вина, водки, бутылку пива, сливочное масло, сметану, горчицу, укроп, петрушку, тмин, соль, перец… В общем, рейтинг у программы был бешеный, раки получились такие, что пальчики оближешь (один соус чего стоит), а Макаревич (впервые за всю историю «Смака») тут же отобрал у Апиной бумажку с рецептом и спрятал в карман.

• Смешная история была с рождественской индейкой, которую должен был готовить Леонид Якубович. Поскольку процесс это очень длительный, в программе был заготовлен «рояль в кустах». Одна индейка была сырая — ее Якубович старательно фаршировал, украшал и ставил в духовку. А вот вынимал оттуда уже совсем другую, которая была заранее приготовлена в целях экономии времени. Передачу сняли, все разошлись, а про сырую индейку, которую вернули допекаться в духовку, забыли… К тому времени в монтажной остался работать только режиссер Павел Судаков. Сидит он за пультом, чувствует — запах приятный из кухни… В общем, ему она вся, тепленькая, и досталась.

Анжелика Варум — биография, личная жизнь, фото, новости, песни, Леонид Агутин, «Городок», «Зимняя вишня» 2021

Биография

Анжелика Варум — популярная российская эстрадная певица и автор песен. Варум носит звание заслуженной артистки РФ и является членом Международного союза деятелей эстрадного искусства.

Творческая биография знаменитости стартовала еще в начале 90-х годов, уже тогда молодой исполнительнице удалось занять место в первом ряду российской эстрады. Сегодня певица продолжает творческий путь, не снижая той планки, которую взяла много лет назад.

Детство и юность

Мария Варум (настоящее имя популярной певицы) родилась в украинском Львове, который на тот момент входил в состав Советского Союза. Ее родители — творческие и известные люди. Отец Юрий Ицхакович Варум — знаменитый композитор, а мать Галина Михайловна Шаповалова — театральный режиссер-постановщик. Из-за непрерывных гастролей родителей девочке большую часть детства пришлось провести с бабушкой. По национальности Анжелика — украинка, но от предков в наследство получила также еврейские и немецкие корни.

Общеобразовательную школу Мария посещала во Львове, а музыке обучалась на дому под руководством отца, который был категорически против государственных музыкальных школ. Он считал, что поставленные программой рамки ограничивают творческий потенциал детей.

Анжелика Варум и Леонид Агутин в молодости

С 5 лет девочка училась игре на фортепиано, а в подростковом возрасте самостоятельно освоила гитару. В старших классах Варум состояла в школьной труппе и даже ездила на гастроли. Она не только играла роли в различных спектаклях, но и пела украинские народные песни под собственное гитарное сопровождение.

Сцена настолько привлекала девушку, что после получения аттестата она отправилась в Москву и подала документы в знаменитое Щукинское театральное училище. Но экзамены абитуриентка провалила, поэтому ей пришлось вернуться к родителям и начать подрабатывать в студии отца, исполняя бэк-вокальные партии.

Музыка

В 1989 году начинающая певица записала 2 сольные песни, созданные отцом. Это были «Полуночный ковбой» и «Здравствуй и прощай». Первая из них стала всесоюзным шлягером. Именно с ним Варум дебютировала как певица в телевизионной программе «Утренняя звезда». Тогда же она взяла себе псевдоним Анжелика, изменив ласковое домашнее обращение бабушки, которая называла ее Ангел.

Через 2 года вышел первый полноформатный альбом Анжелики Варум «Good Bye, мой мальчик», который сразу стал популярным. Заглавная песня, рассказывающая о расставании юных влюбленных из-за падения СССР и рефреном повторяющая ставшее афоризмом «Гудбай, мой мальчик», стала гимном того времени для сверстников певицы.

В 1992 году артистка получила приглашение к сотрудничеству от Примадонны российской эстрады. Опыт работы в «Театре Аллы Пугачевой» помог Варум в дальнейшем подняться на новую ступень в собственном творчестве.

Анжелика Варум в 90-х годах

Второй альбом «Ля-ля-фа» 1993 года упрочил популярность Варум. Песня «Художник, что рисует дождь» стала знаменитым хитом, песня «Городок» долгое время являлась саундтреком к популярной одноименной юмористической передаче, а «Ля-ля-фа» стала номинантом на премию «Песня года».

Следующий диск 1995 года «Осенний джаз» получил награду «Овация» как лучший альбом, одноименная песня стала лучшим видеоклипом, а саму Анжелику Варум назвали певицей года. Последующие пластинки «В двух минутах от любви» и «Зимняя вишня» упрочивали популярность среди поклонников, но новых наград не принесли.

На пару лет Варум сделала перерыв в музыкальной карьере и попробовала себя в образе актрисы. Она сыграла роль украинки Кати в спектакле режиссера Леонида Трушкина «Поза эмигранта» по пьесе Ганны Слуцки «Банкир». За прекрасную игру в этой постановке Анжелика получила театральную премию «Чайка». Примерно тогда же она сыграла одну из первых ролей в фильме «Небо в алмазах».

Posted by Анжелика Варум — Зимняя вишня on Saturday, December 24, 2011

Анжелика Варум в клипе «Зимняя вишня»

В 1999 году вышла новая пластинка «Только она», начался творческий дуэт Анжелики Варум и Леонида Агутина. Вместе музыканты записали песни «Королева», «Все в твоих руках», «Если ты когда-нибудь меня простишь» и другие. Итогом стал популярный диск «Служебный роман», вышедший в 2000 году. В этот период творческой биографии музыкальные клипы на композиции дуэта и сольные песни Варум режиссировал Федор Бондарчук.

Совместное исполнение Варум и Агутина повторилось еще на многих пластинках, например, «Стоп, любопытство», «Две дороги, два пути». А в песне «Быть частью твоего» к дуэту Варум — Агутин присоединились Владимир Пресняков — младший и его супруга (на тот момент) Наталья Подольская. Дуэт Анжелики Варум и Леонида Агутина 6 раз стал лауреатом премии «Золотой граммофон».

В 2004 году Анжелика сотрудничала с популярным ВИА «Сливки». Вместе с ними Варум записала песню и музыкальный клип «Самая лучшая». Этот же год Варум и Агутин провели на гастролях: дуэт выступал в Германии, США, Израиле и на постсоветском пространстве.

Анжелика Варум и Леонид Агутин

Анжелика Варум регулярно выпускала сольные диски. В 2007 году вышел двойной альбом «Музыка», в 2009-м — «Если он уйдет». В 2011-м за заслуги в области искусства звезда получила почетное звание «Заслуженный артист Российской Федерации».

В январе 2013 года Анжелика Варум и Леонид Агутин уехали в концертный тур «Как не думать о тебе?» по странам СНГ, России, США и Канады. Затем певица погрузилась в работу над альбомом «Сумасшедшая», изданным в 2013-м. Вместе с выходом пластинки Варум презентовала 2 клипа на песни «Сумасшедшая» и «Я всегда с тобой».

На концерте 2015 года в честь 8 Марта в Кремлевском дворце Варум исполнила композицию «Два крыла». Музыку написал Тарас Паненко, слова — Алиса Осенина.

Тогда же исполнительницу пригласили на шоу «Наедине со всеми». Она рассказала ведущей Юлии Меньшовой о первых песнях, ставших хитами, знакомстве с Леонидом Агутиным и многом другом.

Анжелика Варум и ее семья

В 2016 году Анжелика Варум представила новый альбом под названием «Женщина шла». Певица самостоятельно написала тексты песен новой пластинки, а автором музыки выступил композитор Игорь Крутой. Альбом состоит из 12 лирических музыкальных композиций, которые раскрывают хрупкий душевный мир современницы.

Поклонники назвали диск «творческой исповедью» певицы, а видео на песню «Опоздавшая любовь» сравнили с кадрами из кинофильма «Три тополя на Плющихе». Премьера альбома, куда вошли песни «Голос», «Моя любовь», «Твой свет», состоялась в рамках конкурса «Новая волна – 2016» на творческом вечере Игоря Крутого. Спустя год видеотека артистки пополнилась двумя новыми работами на песни «Мама» и «Девочки умеют». Видеография исполнительницы насчитывает десятки музыкальных клипов.

В апреле 2017 года дуэт Варум и Агутина обвинили в том, что Анжелика на час задержала начало концерта в Ульяновске, а Леонид вышел на сцену в нетрезвом виде. Музыканты прокомментировали этот слух, объяснив, что певица простыла, потребовалось менять программу, из-за чего и произошла задержка. А Леонид как любящий муж волновался за супругу, потому и вел себя на концерте несколько нервно.

Стрижка Анжелики Варум

Из-за печально известных событий в Кемерово, связанных с пожаром в торгово-развлекательном центре «Зимняя вишня», Анжелика Варум прекратила исполнять на концертах одноименную песню. По словам Леонида Агутина, трек вряд ли вернется в репертуар артистки, но он надеется, что музыкальная композиция в скором времени перестанет ассоциироваться с трагедией.

Дуэт Варум — Агутин продолжает радовать поклонников новыми музыкальными композициями. В 2018 году артисты представили хит «Любовь на паузу», на который также создали клип. Песня вошла в трек-лист новой пластинки певицы «На паузу», где разместились еще 9 композиций, в том числе «Минус 20», «Солнце». В этом же году Анжелика издала 2 сольных видеоролика на песни «Женщина шла» и «Ливни».

В 2019 году Анжелика выпустила новый клип на песню «Касайся». Варум предполагала, что работа над видео завершится к празднику 8 Марта, но на стадии монтажа режиссер Алексей Дубровин решил добавить к существующим кадрам еще несколько сцен.

Исполнительница дала интервью «Каравану историй», где рассказала о прелестях возраста, родителях и детстве. Требовательность матери привила девочке «организованность, ответственность, чувство вкуса и стиля». А от отца Анжелике достался синдром отличницы.

Анжелика Варум — «Городок»

На юбилей — Варум исполнилось 50 лет, певицу пришли поздравить Владимир Пресняков, Наталья Подольская, Юлия Савичева и другие. Творческий вечер состоялся в рамках фестиваля «Новая волна – 2019».

Для фолловеров в 2019 году Варум приготовила музыкальный сюрприз. Вместе с певицей Садо (Надежда Новосадович) артистка стала участницей акустического проекта, который отличается от ее привычного репертуара. Композиция «Грустная bossa», записанная в стиле бразильской музыки, стала первой ласточкой нового альбома с одноименным названием. Вышел он в 2020 году и состоит из 10 песен.

В ноябре Варум в программе «Смак» с Андреем Макаревичем готовила домашние куриные котлеты. Певица привезла с собой продукты и необходимую технику. Неожиданно на программе появился и Леонид Агутин, чтобы помочь супруге.

В декабре Анжелика вместе с Леонидом Ярмольником стала гостьей передачи «Вечерний Ургант». Артисты рассказали, как работали над озвучиванием проекта «Союзмультфильма». «Чебурашка. Секрет праздника» вышел в конце месяца. Агутин написал к ролику музыку.

Личная жизнь

Первым мужем знаменитой певицы был ее бывший одноклассник, а впоследствии и осветитель на концертах, Максим Никитин. Родители были против этого брака дочери, вместе с Марией они уехали в Москву. Но избранник Варум последовал за ней. После того как Максим отслужил в армии, они поженились. Этот брак продлился 8 лет, но супруги так и не завели детей — Анжелика была увлечена музыкальной карьерой.

В этот период отец Анжелики заключил новый брак, в котором у него в 1990 году родился сын, единокровный брат певицы Михаил.

В 1997 году в личной жизни певицы произошли изменения. Варум познакомилась с Леонидом Агутиным, который стал ее партнером на сцене. Творческий союз со временем перерос в полноценные отношения, и Леонид стал спутником жизни звезды. В 1999-м Анжелика родила ребенка, и музыканты решили оформить отношения. Официально они стали супругами в 2000-м, через год после рождения дочери Елизаветы. Свадьбу артисты сыграли в Венеции.

Анжелика Варум и Леонид Агутин

Дочь пошла по стопам родителей. Вместе с дедушкой Юрием и его новой семьей Лиза поселилась в Майами, где и окончила школу. Еще в подростковом возрасте она основала собственную рок-группу Without Gravity, с которой выступала на концертах. Девушка не планирует возвращаться в Россию.

Анжелика Варум не только успешно исполняет песни и играет на сцене, она бизнесвумен. В конце 90-х годов артистка открыла собственную линию ароматов — духи «Анжелика Варум». Созданием парфюма занимался французский мастер Жак Кавалье. А в 2001 году исполнительница открыла совместную с отцом звукозаписывающую компанию Varum Records Company.

Агутина регулярно подозревают в изменах Анжелике, но он отвечает, что для него важна только «его Маня». Пара вместе больше 20 лет, но супруги не устают устраивать романтические поездки, и муж с удовольствием фотографирует Варум в купальнике — у нее безупречная фигура (при росте 167 см вес около 50 кг).

Анжелика Варум и ее дочь

Анжелика Варум ведет аккаунт в «Инстаграме», где делится студийными фото, которые разбавляет семейными кадрами и снимками с дружеских встреч. Частый герой странички Анжелики — серая кошка певицы.

Анжелика относится к тем исполнительницам, которые не боятся экспериментов с собственным стилем. Перед публикой артистка представала шатенкой, брюнеткой и блондинкой. Длинные волосы, которые так нравились Анжелике в молодости, с годами она сменила на короткую стрижку.

В 2019 году появились слухи о том, что у исполнительницы обнаружилась тяжелая болезнь. Очевидец, заметивший звезду в клинике, утверждал, что Анжелика была в парике и выглядела вялой. Поклонники забеспокоились, отметив, что на снимках Варум сильно похудела и часто предстает без макияжа. Но последующая активность звезды опровергла домыслы — она не только выступала, но и участвовала в телепередачах.

Анжелика Варум сейчас

Концерт звездной пары, запланированный в Карелии, был перенесен на октябрь 2021 года. Место проведения мероприятия: Ледовый дворец Кондопоги. Изначально певцов ждали в Петрозаводске, в спортивном комплексе «Луми».

На своей страничке в «Инстаграме» Анжелика поделилась с поклонниками новостью, что в 2021-м каждый четверг будет появляться на своем ютьюб-канале «Варум. Live». В первом выпуске года 7 января прозвучала «Тайна для двоих» — песня, не вошедшая в альбом «Грустная bossa».

Дискография

• 1991 — «Good bye, мой мальчик»
• 1993 — «Ля-ля-фа»
• 1995 — «Осенний джаз»
• 1996 — «В двух минутах от любви»
• 1996 — «Зимняя вишня»
• 1999 — «Только она…»
• 2000 — «Служебный роман»
• 2002 — «Стоп, любопытство»
• 2007 — «Музыка»
• 2009 — «Если он уйдет»
• 2013 — «Сумасшедшая»
• 2016 — «Женщина шла»
• 2018 — «На паузу»
• 2020 — «Грустная bossa»

стоимость акций на сегодня, график котировок IRGZ, динамика курса онлайн, прогноз цены акций ИркЭнерго

Предлагаем рассмотреть акции Intel от уровня $53,69 с целью $60 на срок до 6 месяцев. Потенциальная доходность составляет 11,8%. Ограничить убыток можно при снижении стоимости на 7–8%.

Стоит отметить, что в ноябре и феврале ожидаются дивиденды, что добавит дополнительные 1,3% доходности за весь срок идеи.

Почему интересны акции

• В условиях полупроводникового кризиса компания нацелилась на расширение производства, что является одним из главных долгосрочных драйверов роста.

• Компания активно развивает технологии IoT, 5G и облачные вычисления, технологии центров обработки данных, которые активно внедряются в повседневную жизнь и являются стимулами для увеличения выручки в будущем.

• Intel оптимизирует производственный процесс, отдав малую долю на аутсорсинг в TSMC. При этом сама компания сосредоточилась на агрессивной политике возвращения технологического превосходства, собственном контрактном производстве и исследованиях.

• Текущий показатель P/E немного ниже форвардного и весьма ниже значений AMD и NVIDIA, что говорит о сильной недооценке. Результатом этого стали слабые финансовые результаты и потеря долей на разных рынках из-за технологического отставания, что привело к распродаже акций и их дешевизне. Компания планирует наверстать эти упущения с помощью нового генерального директора.

• Intel улучшила прогноз выручки за полный 2021 г. с $77 млрд до $77,6 млрд. Прогноз по скорректированному EPS также был увеличен — с $4,6 до $4,8.

• Недавно компания получила контракт от Минобороны США, что поддерживает зарождающийся контрактный бизнес. В будущем это может сказаться положительно и увеличить привлекательность работы с Intel.

• Аналитики сохраняют умеренно позитивный взгляд по акциям. 12 из 39 рекомендаций на покупку, 15 — держать и лишь 7 продавать. Таргеты варьируются в диапазоне $40–80, а средний — $61,8.

• С технической стороны акции находятся в боковике уже длительное время. При этом более глубокое снижение сдерживается покупателями. Дневной и недельный RSI не сообщает о перекупленности. Стоит отметить, что недельные кривые MACD начали разворачиваться вбок, что потенциально может привести к их пересечению и новой фазе роста.

Риски

• Слабые финансовые результаты и продолжение сокращения доли на ключевых рынках из-за увеличения конкурентоспособности со стороны AMD и NVIDIA

• Новые задержки в производстве и, как следствие, увеличение технологического отставания. Это также относится и к нарушению цепочек поставок.

• Общая коррекция на рынке США ввиду перекупленности рынка в целом.

• Общеэкономический спад с дальнейшим снижением спроса.

БКС Мир инвестиций

Домашний вкус добавляет неповторимый вкус

Недавно я приготовил гамбургеры на гриле и посыпал их восхитительным домашним жареным красным перцем и тонкими ломтиками острого белого сыра Чеддер. Мне пришло в голову, что из них получится прекрасное блюдо, которое сыновья и дочери могут собрать на празднование Дня отца.

Особенность этих гамбургеров — в их вкусе. Жареный перец, нарезанный кубиками, быстро обжаривается вместе с нарезанным луком и чесноком; затем вы добавляете яблочный уксус и сахар, а также немного сухой горчицы и кайенского перца.Наконец, смесь кипятят 5 минут, пока вся жидкость не испарится. Эту легкую приправу можно приготовить на день вперед, накрыть и хранить в холодильнике до тех пор, пока она не понадобится.

Кукуруза в початках или свежий кукурузный пудинг и смешанный зеленый салат с чесночной заправкой для заправки винегретом могут стать хорошими гарнирами. Пирожные с клубникой и черникой могли бы дополнить меню.

Бургеры «День отца» с жареным красным перцем и сыром Чеддер

Приправленность:

Оливковое масло

2 больших сладких красных перца, нарезанных кубиками (см. Примечание)

1 чашка нарезанного лука

2 чайные ложки измельченного чеснока

3 столовые ложки яблочного уксуса

2 столовые ложки сахара

1/4 чайной ложки сухой горчицы

1/8 чайной ложки кайенского перца

1 чайная ложка соли

1-1 / 2 столовые ложки измельченной петрушки, предпочтительно плоских

Бургеры:

Нежирный говяжий фарш 1-1 / 2 фунта

1-1 / 2 чайных ложки сушеных листьев тимьяна

1-1 / 2 чайных ложки соли

Небольшое количество 1/2 чайной ложки свежемолотого черного перца

6 булочек для гамбургеров хорошего качества

Около 6 унций острого белого сыра Чеддер, тонко нарезанного

Нагрейте оливковое масло в большой тяжелой сковороде на среднем или сильном огне.Добавьте красный перец и обжарьте, помешивая, 1-2 минуты. Добавьте лук и чеснок, готовьте и перемешивайте, пока лук не станет мягким, еще примерно 3 минуты.

Смешайте уксус и сахар в маленькой миске и перемешайте до полного растворения. Вмешайте смесь перцев, горчицы, кайенского перца и соли и хорошо перемешайте. Готовьте, помешивая, около 5 минут, пока вся жидкость не испарится. Снять с огня и остудить. (Приправу можно приготовить за день; накрыть и довести до комнатной температуры перед использованием.) Перед подачей на стол перемешать петрушку.

Положите в миску говяжий фарш, тимьян, соль и перец и хорошо перемешайте. Сформируйте 6 котлет. (Бургеры можно приготовить за 1 день; накрыть крышкой и поставить в холодильник.)

Когда все будет готово, приготовьте гриль. Когда будете готовы, жарьте гамбургеры на гриле, пока они не будут готовы, примерно по 4-5 минут на каждую сторону. Готовьте булочки на гриле, чтобы они слегка поджарились. Когда гамбургеры почти готовы, покройте каждый сыром и готовьте ровно столько, чтобы сыр расплавился.

Чтобы подать, выложите бургеры на булочки и посыпьте щедрой порцией жареного красного перца.

Выход: 6 гамбургеров.

Информация о питании на порцию: 591 калория, 37,5 грамма жира (57 процентов жировых калорий), 32 грамма белка, 30 граммов углеводов, 115 миллиграммов холестерина, 1487 миллиграммов натрия.

Примечание. Чтобы запекать перец, поместите его прямо на газовую горелку или на противень на расстоянии 7-8 дюймов от жаровни. Жарьте, периодически переворачивая, пока перец не станет черным и обугленным со всех сторон.

Оберните перец влажными бумажными полотенцами и поместите в полиэтиленовый пакет.Запечатайте мешок. Дайте перцу запариться 10-15 минут. Затем снимите с перца черную обугленную кожуру острым ножом для очистки овощей и удалите семена и стебли.

Жареный перец можно поместить в банку или миску, залить оливковым маслом и поставить в холодильник под крышкой на срок до 3 дней. Слейте воду и высушите перед использованием.

Активация фактора Relish NF-κB дрозофилы с помощью быстрого эндопротеолитического расщепления

Abstract

Фактор транскрипции Rel / NF-κB Relish играет ключевую роль в гуморальном иммунном ответе у Drosophila .Теперь мы обнаружили, что активации этого врожденного иммунного ответа предшествует быстрое протеолитическое расщепление Relish на две части. N-концевой фрагмент, содержащий ДНК-связывающий домен гомологии Rel, перемещается в ядро, где он связывается с промотором гена Cecropin A1 и, вероятно, с промоторами других генов антимикробных пептидов. С-концевой IκB-подобный фрагмент остается в цитоплазме. Это эндопротеолитическое расщепление не затрагивает протеасомы, требует каспазы DREDD и отличается от ранее описанных механизмов активации фактора Rel.

ВВЕДЕНИЕ

Белки Rel / NF-κB являются важными регуляторами врожденного иммунитета как у млекопитающих, так и у насекомых (Ghosh et al. , 1998). Эти активаторы транскрипции находятся в цитоплазме в виде гомо- или гетеродимеров в комплексе с ингибирующей молекулой IκB. После иммунного заражения IκB сначала фосфорилируется, а затем деградирует посредством пути убиквитин / протеасома, высвобождая, таким образом, активные димеры NF-κB. Освободившиеся димеры перемещаются в ядро, где они действуют как факторы транскрипции.Два белка Rel, p50 и p52, продуцируются из более длинных предшественников, p105 и p100. Предшественники имеют длинные IκB-подобные удлинения на своих С-концевых концах, которые разрушаются также на протеасомозависимой стадии. Однако процессинг p105 и p100 в значительной степени является конститутивным, и неясно, связано ли это с эндопротеолитическим расщеплением.

Недавно мы описали нового члена семейства Rel / NF-κB, Relish, который имеет решающее значение для гуморального иммунного ответа у Drosophila (Dushay et al., 1996). У мутантов Relish индукция противомикробной защиты сильно снижена, и животные чрезвычайно чувствительны к бактериальной и грибковой инфекции (Hedengren et al. , 1999). Подобно человеческим p100 и p105, Relish является составным белком, содержащим N-концевой домен гомологии Rel (RHD) и C-концевой IκB-подобный участок. Неожиданно мы обнаружили, что активация Relish происходит через эндопротеолитический этап, который строго зависит от сигнала и не включает протеасомы.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Полноразмерный белок Relish

Чтобы проследить судьбу различных доменов белка Relish, мы вырабатывали антитела против пептида из домена гомологии Rel (α-RHD, см. Рисунок A), который не является консервативным. между известными белками Rel. Мы также создали пептидные антитела против эпитопов на длинных N- и C-концевых участках (α-N и α-C). Они не имеют аналогов в других белках Rel. Используя эти антитела в иммуноблоттинге, мы видим, что Relish проявляется как основная полоса ~ 110 кДа у самцов и самок мух (REL-110, Рисунок B), в линии клеток крови Drosophila mbn-2 (Рисунок A) и в личинки третьего возраста (Рисунок B).Это хорошо согласуется с предсказанной молекулярной массой 109 кДа для открытой рамки считывания. Подвижность этой полосы идентична , переведенному in vitro на Relish (не показано). Таким образом, в нормальных условиях Relish в основном присутствует в виде полноразмерного белка. Кроме того, полоса 100 кДа (REL-100, Рисунок B) наблюдается у самок мух и эмбрионов и, вероятно, соответствует материнскому транскрипту Relish (Dushay et al. , 1996; Hedengren et al. , 1999).Этот транскрипт кодирует белок с более коротким N-концом и расчетной молекулярной массой 98 кДа. След REL-100 также наблюдается у мужчин, и возможно, что материнский промотор также активен в некоторых тканях мужчин.

Рис. 1. Белки, производные от вкуса. ( A ) Карта белков, продуцированных из гена Relish , включая продукты расщепления REL-68 и REL-49. Положения пептидов, используемых для получения специфических антител, обозначены звездочками.( B ) Вестерн-блоттинг неочищенных экстрактов эмбрионов дикого типа, самцов и самок мух и мутанта Relish Rel ^E20 , обнаруженного с помощью α-C. Где указано, мухам вводили E. cloacae в течение 6 часов. Маркеры молекулярной массы даны в кДа.

Рис. 2. Обработка Relish, вызванная сигналом. ( A и B ) Вестерн-блоттинг показывает динамику (в минутах) белковых экстрактов либо из индуцированных клеток mbn-2 [(A), 25 мкг белка / дорожка], либо из инфицированных личинок дикого типа [(B), ∼0.5 эквивалентов животных / переулок]. В (A) мембрану сняли перед вторым детектированием. Антитела, используемые для обнаружения различных форм Relish, указаны слева от каждой мембраны. ( C ) Пульс-преследование in vivo меченых белков, полученных из Relish. [ ³⁵ S] меченные метионином белки экстрагировали из клеток mbn-2, либо индуцировали LPS в течение 5 минут, либо оставляли без обработки. Продукты приправы иммунопреципитировали указанными кроличьими антителами. Образцы разделяли гель-электрофорезом, гель сушили и экспонировали на рентгеновской пленке.( D ) Иммуноблоттинг экстрактов из клеток mbn-2, обработанных циклогексимидом для ингибирования биосинтеза белка до и во время заражения.

Фигура B также показывает, что мутантный штамм Rel ^E20 лишен перекрестно реагирующего материала, что подтверждает специфичность антисыворотки, а также отсутствие генного продукта у этого нулевого мутанта (Hedengren et al. , 1999).

Сигнально-зависимое расщепление Relish

Когда мух заражают Enterobacter cloacae , у мух дикого типа появляется С-концевой фрагмент 49 кДа (REL-49) (рис. B).Такая же полоса также наблюдается в клетках mbn-2 при стимуляции липополисахаридом (ЛПС) (рис. A). Соответствующая N-концевая часть Relish может быть обнаружена с помощью антисыворотки против α-N в виде фрагмента 68 кДа (REL-68, фигура A). Эта антисыворотка также обнаруживает несколько полос в диапазоне 60 кДа. Они не наблюдаются при α-RHD (сравните Рисунок A) и, следовательно, вероятно, связаны с неспецифической перекрестной реактивностью.

Рис. 3. Субклеточная локализация Relish до и после иммунного заражения. ( A ) Вестерн-блоттинг с цитоплазматическими и ядерными экстрактами из клеток mbn-2 (50 мкг белка / дорожка), проявленный с помощью α-C, очищенный и затем проявленный с помощью α-RHD.( B ) Иммуноокрашивание клеток mbn-2 с помощью α-RHD и α-C, необработанных или через 30 с после контрольного заражения. ( C ) Жировые тела личинок дикого типа, необработанные или взятые через 1 час после заражения, иммуноокрашенные α-RHD. На вставках в (B) и (C) показано окрашивание DAPI в виде наложений из одной и той же области образца. ( D ) Анализ сдвига геля на участие Relish в активности связывания κB. Клетки Mbn-2 индуцировали в течение 1 ч, и ядерные экстракты инкубировали с олигонуклеотидом CecA1 κB. Где указано, добавляли антисыворотку против Relish или соответствующую преиммунную сыворотку (Pi) (левая панель).В соревновательном эксперименте мы также добавляли возрастающие количества пептида, против которого была повышена сыворотка. Добавление 500 нг пептида без антител не дало никакого эффекта.

Фрагменты REL-68 и REL-49 появляются одновременно, и в то же время полноразмерный REL-110 полностью исчезает в ячейках mbn-2 (Рисунок A). Эта реакция на удивление быстра; на рисунке А это происходит в течение 30 с. В других экспериментах мы наблюдали полное расщепление Relish уже через 13 с после добавления LPS (не показано).Полноразмерный белок снова обнаруживается после фазы задержки в 45 минут, в течение которой ген Relish становится транскрипционно активированным (Dushay et al. , 1996). Уровни REL-68 и REL-49 сначала медленно снижаются, а затем снова увеличиваются по мере формирования более полноразмерного Relish (это увеличение не очевидно для REL-49 на рисунке A, но было замечено в нескольких других экспериментах).

Инфицированные личинки демонстрируют кинетику расщепления и повторного появления Relish, аналогичную клеткам mbn-2, хотя значительные уровни полноразмерного REL-110 всегда сохраняются в личинках (Рисунок B).Иммуногистохимия выявляет присутствие белка Relish в большинстве тканей личинок, но не все реагируют на бактериальную нагрузку (не показано), и это может объяснить оставшийся REL-110 в экстрактах личинок. И наоборот, у необработанных животных или клеток иногда обнаруживаются низкие количества продуктов расщепления Relish, что указывает на низкий уровень спонтанной активации системы.

Чтобы проверить, образуются ли REL-68 и REL-49 путем отщепления от REL-110, а не путем синтеза de novo , мы провели импульсный эксперимент.На рисунке C показано, что радиоактивность, включенная в REL-110, может быть преобразована в REL-68, который выглядит как радиоактивно меченый мазок вместе с рядом неспецифических соосажденных белков. Мы не смогли сделать никаких выводов относительно REL-49 в этом эксперименте, поскольку этот белок накапливался уже в необработанных клетках в течение периода мечения. Поэтому мы проверили, может ли REL-49 образовываться в присутствии циклогексимида, который блокирует синтез белка. На фигуре D показано, что REL-49 продуцируется нормальным образом в зараженных клетках, хотя повторное появление полноразмерного белка блокируется.Таким образом, ни REL-68, ни REL-49 не образуются в результате синтеза de novo , а в результате расщепления Rel-110.

Ядерная транслокация REL-68

После субклеточного фракционирования клеток mbn-2 большая часть белка REL-110 обнаруживается в цитоплазматической фракции (рис. A). Однако после стимуляции LPS образующийся REL-68 локализуется в ядерной фракции. Напротив, IκB-подобный REL-49 сохраняется в цитоплазме. Ядерная транслокация REL-68 также может отслеживаться с помощью иммуногистохимии.На рисунке B показано, что Relish в основном является цитоплазматическим в необработанных клетках mbn-2. После добавления LPS RHD-содержащий белок перемещается в ядра, в то время как C-концевой фрагмент остается в основном цитоплазматическим. Ядерная транслокация RHD также очевидна в жировом теле (Рисунок C) и в лимфатических узлах (не показаны) инфицированных личинок.

REL-68 является частью κB-связывающей активности

Из фенотипа мутантов Relish мы знаем, что Relish требуется для индукции генов антимикробных пептидов, таких как Cecropin A1 ( CecA1 ; Hedengren ). и другие., 1999). Здесь мы показали, что Relish расщепляется на две части в течение нескольких секунд после иммунного заражения и что RHD-содержащий фрагмент REL-68 перемещается в ядро. Чтобы проверить, является ли взаимодействие между REL-68 и промотором CecA1 прямым, мы провели анализ сдвига геля на консервативном κB-подобном мотиве из промотора CecA1 . Предыдущие эксперименты продемонстрировали комплекс между олигонуклеотидом κB и индуцированным фактором из ядерных экстрактов зараженных клеток mbn-2 (Engström et al., 1993). Рисунок D демонстрирует, что α-RHD вызывает полный сверхсдвиг κB-связывающего комплекса. Этот эффект специфичен и не наблюдается с преиммунной сывороткой. Сходные результаты были получены с κB-сайтом из промотора дрозомицина после сверхэкспрессии Relish (Han and Ip, 1999). Здесь мы показываем, что даже на физиологических уровнях Relish все белковые комплексы, которые связываются с сайтом κB гена CecA1 , содержат белок Relish REL-68. Никакого эффекта не наблюдается с антителами α-C, что указывает на то, что ни REL-49, ни REL-110 не взаимодействуют с промотором.

Расщепление Relish является самым ранним наблюдаемым следствием бактериального заражения и, вероятно, будет ключевым шагом в активации гуморального иммунного ответа у Drosophila . Полученный в результате фрагмент REL-68 перемещается в ядро, где он связывается с сайтом κB в промоторе гена CecA1 и, вероятно, также с генами других генов, индукция которых зависит от Relish (Hedengren et al. , 1999). То, что REL-68 является активной формой Relish, подтверждается более ранними наблюдениями о том, что избыточной экспрессии N-концевой части Relish достаточно для активации транскрипции иммунных генов (Dushay et al., 1996; Хан и Ип, 1999). Вместе с REL-68 другие факторы, такие как DIF, могут участвовать в индукции CecA1 и других генов (Ip et al. , 1993; Han and Ip, 1999; Rutschmann et al. , 2000a). Удивительно, но транслокация Relish не ингибируется продолжительным присутствием IκB-подобной части REL-49. Возможная функция этого фрагмента еще предстоит исследовать.

В расщеплении Relish не участвует протеасома.

Быстрый сигнально-зависимый протеолиз Relish и устойчивость обоих продуктов расщепления являются неожиданными и сильно контрастируют с тем, что известно о процессинге p105 млекопитающих.Принимая во внимание, что протеасома необходима для процессинга p105 (Palombella et al. , 1994), мы сочли маловероятным, что этот белковый комплекс способен к эндопротеолитическому расщеплению, учитывая современные модели структуры и функции протеасомы (Gottesman et al. ). , 1997; Ларсен, Финли, 1997). Поэтому мы исследовали влияние хорошо изученных ингибиторов протеасом на процессинг Relish. Было показано, что лактацистин и пептидный альдегид MG132 ингибируют процессинг p105 в p50 и деградацию IκBα (Palombella et al., 1994; Lin et al. , 1998; Ориан и др. , 1999). MG132, лактацистин и ингибитор кальпаина I также успешно использовались для ингибирования протеасомозависимой деградации белка Timeless у Drosophila (Naidoo et al. , 1999). На рисунке A показано, что MG132 не предотвращает зависимое от сигнала расщепление REL-110 в концентрациях, которые, как известно, блокируют активность протеасом. Эффективность ингибирования протеасом была продемонстрирована накоплением мультиубиквитилированных белков, что было обнаружено с помощью антитела к убиквитину.Аналогичные результаты были получены с лактацистином и ингибитором кальпаина I (не показано).

Рис. 4. Ингибирование протеасом и обработка вкуса. ( A ) Иммуноблоттинг белковых экстрактов из культур клеток, обработанных различными концентрациями MG132 перед иммунным заражением. Мембрана была сначала разработана с помощью α-C, а затем с помощью антитела против убиквитина для визуализации накопления полиубиквитилированных белков, обозначенного скобкой. Добавление растворителя ДМСО или только ингибиторов не индуцировало процессинг Relish.( B ) Вестерн-блоттинг с белковыми экстрактами личинок дикого типа и EP (X) 1412 третьего возраста. Где указано (+), животные были инфицированы за 45 минут до приготовления экстракта. Различные формы Relish были обнаружены с помощью α-C.

Возможный кандидат на роль эндопротеазы Relish предполагает недавнее наблюдение, что мутации в гене Dredd , который кодирует каспазу (Chen et al. , 1998), блокируют индукцию антибактериальных генов (Elrod- Erickson et al., 2000; Leulier et al. , 2000). На фигуре B показано, что REL-49 не образуется у инфицированных личинок мутанта Dredd EP (X) 1412, тогда как личинки дикого типа явно индуцируются. Таким образом, DREDD должен действовать выше Relish в пути передачи сигнала. Это действительно может быть фермент, который расщепляет Relish, или он может участвовать в протеолитическом каскаде, который приводит к активации Relish.

Будет важно дополнительно проанализировать механизм, который контролирует расщепление и активацию Relish, чтобы понять регуляцию гуморального иммунного ответа у Drosophila .Недавние эксперименты показывают, что помимо протеазы важную роль также играет киназный комплекс, родственный IKK человека. Эта киназная активность фосфорилирует Relish сигнально-зависимым образом и требуется для расщепления Relish (Silverman et al. , 2000). Мутации в генах двух участвующих белков показывают снижение уровней экспрессии антимикробных пептидов при инфицировании (К. Андерсон и Д. Феррандон, личное сообщение; Rutschmann и др. , 2000)

На основании наших результатов мы теперь может добавить белок Rel к растущему семейству факторов, таких как SREBP, Notch и APP, которые активируются эндопротеолитическим расщеплением (Chan and Jan, 1998).Механизм явно отличается от конститутивного процессинга p105, который строго зависит от протеасомы и который ведет к полной деградации IκB-подобной части (Palombella et al. , 1994). Однако процессинг p105 сложен и до конца не изучен и может включать эндопротеолитическую стадию (Lin and Ghosh, 1996; Lin et al. , 1998; Orian et al. , 1999). Кроме того, описан зависимый от сигнала процессинг p105, который, скорее, ведет к полной деградации всей молекулы (Heissmeyer et al., 1999). Будущие эксперименты покажут, какие отношения могут существовать между механизмом активации Relish и активацией NF-κB у человека.

МЕТОДЫ

Культуры клеток и мух. Гемоцитоподобная клеточная линия Drosophila mbn-2 (злокачественное новообразование крови; Gateff et al. , 1980; Samakovlis et al. , 1992) выращивалась в среде Шнайдера (Pansystems) с 5% фетальной сывороткой теленка. , 1 × Glutamax I (Gibco-BRL), 50 Ед / мл пенициллина, 50 мкг / мл стрептомицина и 50 мкг / мл гентамицина.Мух содержали на агаризованных средах при 25 ° C и влажности 60%. В качестве штамма дикого типа использовали Canton-S. Описан штамм с дефицитом Relish Rel ^E20 (Hedengren et al. , 1999). EP (X) 1412 (Rorth et al. , 1998) был предоставлен складскими центрами в Блумингтоне и Сегеде. Ингибиторы протеасом лактацистин, MG132 (Calbiochem) и ингибитор кальпаина I (Sigma) или разбавитель диметилсульфоксид (ДМСО) добавляли к культурам клеток mbn-2 за 1 час до провокации LPS.Циклогексимид (Sigma) применяли в концентрации 180 мкМ за 30 мин до добавления ЛПС.

Иммунный вызов. Для стимуляции клеток mbn-2 мы добавляли к культурам 10 мкг LPS / мл ( Escherichia coli O55: B5; Sigma). Личинок среднего и конца третьего возраста скручивали в свежевыращенных бактериях ( E. cloacae β12), прокалывали вольфрамовой иглой и помещали на тарелки с яблочным соком на указанное время. Взрослым мухам вводили E. cloacae (Hedengren et al. , 1999).

Иммунореагенты. У кроликов и мышей вырабатывались антитела против пептидов, конъюгированных с гемоцианином лимфы улитки (Hancock and Evan, 1992) с N-конца (PGGNSPHQPPMANSP = α-N), домена гомологии Rel (MNRRELSHKQLQEL = α-RHD) и C -концевая (PLGHGSDPQDRKWM = α-C). Кроличью сыворотку α-N использовали при иммуноблоттинге в соотношении 1:10 000; антитело α-RHD очищали аффинно и использовали в концентрации 550 нг / мл. Для обнаружения части Relish IκB мы также создали клеточные линии гибридомы мыши.Супернатанты использовали при разведении до 1: 100. Все антитела тестировали на специфичность иммунопреципитацией in vitro, переведенной на Relish, и вестерн-блоттингом на материале из клеток mbn-2 с временной сверхэкспрессией Relish. Моноклональный IgG к убиквитину был получен от Санта-Крус (sc-8017). Вторичные антитела, используемые в иммуноблоттинге, представляли собой конъюгаты козьих антимышиных и антикроличьих пероксидазы хрена (Bio-Rad), предварительно адсорбированные на фиксированных параформальдегидом клетках mbn-2. Для иммуногистохимии мы использовали козьи антимышиные и кроличьи IgG, конъюгированные с флуорохромами Cy2 и Cy3 (Jackson ImmunoResearch).

Белковые экстракты, иммуноблоттинг и анализ сдвига геля. Неочищенные белковые экстракты получали из субконфлюэнтных клеточных культур mbn-2 (Petersen et al. , 1995), а цитоплазматические и ядерные белки были обогащены согласно Grant et al. (1992). Для подавления активности протеаз и фосфатаз мы добавили коктейль ингибиторов протеаз (Boehringer), 50 мМ фторид натрия и 1 мМ ортованадат натрия. Концентрации белка определяли методом Брэдфорда (Bio-Rad).Что касается экстрактов мух, животных измельчали ​​в жидком азоте (Petersen et al. , 1995). Эмбрионы собирали в течение ночи, дехорионизировали и лизировали в буфере для образцов SDS – PAGE, содержащем 4% SDS. Личинок быстро вскрывали и гомогенизировали пестиком Эппендорфа в том же буфере. Материал кипятили 5 мин и очищали центрифугированием. Затем образцы разделяли на 7,5% SDS-полиакриламидных гелях и подвергали блоттингу (Hybond-C extra; Amersham). Мембраны инкубировали с первичным антителом в течение ночи при 4 ° C в блокирующем буфере (50 мМ Tris pH 8, 150 мМ NaCl, 0.05% Tween 20, 2% казеина) и промывали в течение 4 × 15 мин в фосфатно-солевом буфере (PBS; Sambrook et al. , 1989) с 0,1% Tween 20. Применяли конъюгаты вторичных антител, разбавленные в блокирующем буфере. в течение 1 ч с последующей промывкой, как указано выше. Иммунокомплексы визуализировались с помощью системы ECLplus, и их также можно было удалить с мембран (Amersham). Стандарты молекулярной массы белка были от Bio-Rad.

Для анализа сдвига геля использовали дезоксиолигонуклеотид 5′-tcgagacacGGGGATTTTTgcac (сайт κB в верхнем регистре).Реакцию связывания ДНК проводили согласно Petersen et al. (1999), за исключением того, что добавляли 0,5 нг зонда, меченного ³² P, и 2 мкг поли (dI-dC). Ядерные экстракты инкубировали с 2 мкл антитела на льду в течение 30 минут перед добавлением олигонуклеотидного зонда, когда это возможно. Для конкуренции с пептидными антигенами пептиды сначала инкубировали с соответствующим антителом в течение 10 мин. Комплекс белок-ДНК разделяли на 5% неденатурирующем полиакриламидном геле и визуализировали с помощью авторадиографии.

In vivo мечение и иммунопреципитация. Культуры субконфлюэнтных клеток инкубировали в среде для насекомых Grace’s без метионина (Gibco-BRL) с 50 мкКи [ ³⁵ S] метионина / мл в течение 4,5 часов. Клетки гнали нормальной средой в течение 30 мин. Затем мы индуцировали одну культуру LPS в течение 5 минут и собирали клетки. Белки экстрагировали в 10 мМ Tris pH 8, 140 мМ NaCl, 1% Triton X-100, 0,6% бычий сывороточный альбумин (BSA), ингибиторы, как указано выше.Иммунопреципитацию проводили согласно Edwards et al. (1997). Мы использовали ~ 300 мкг общего белка, доведенного до 1 мкг / мкл в буфере для лизиса, и 3 мкл кроличьего антитела (либо антисыворотка против α-C, либо смесь 1: 1 α-N IgG и аффинно очищенного α-RHD. ).

Иммуногистохимия. Личинок третьего возраста вырезали наизнанку в PBS с 4% параформальдегидом и фиксировали в течение 20 мин. Образцы промывали в течение 6 × 10 мин 0,1% Triton X-100, 1% BSA в PBS, а затем инкубировали с первым антителом в течение 2 часов.После отмывки в течение 6 × 10 мин 0,1% Тритоном Х-100, 0,1% БСА в PBS наносили вторичное антитело на 1 час. Все антитела разводили в соответствующем промывочном буфере. Клетки mbn-2 центрифугировали на предметных стеклах со скоростью 1000 об / мин. на 5 мин на холоде. Слайдам давали высохнуть, затем клетки фиксировали ацетоном и сушили на воздухе. После блокирования в течение 30 минут в среде для культивирования клеток и двух коротких промывок 0,1% БСА в 10 мМ Трис pH 8, 150 мМ NaCl наносили первое и вторичные антитела, как указано выше.Во всех образцах тканей и клеток ядра окрашивали диамидинофенилиндолом (DAPI) и добавляли 80% глицерина в PBS.

Опаленный бизон на дикой зелени / полевой вкус

Ассоциация бизонов Альберты: вкус Альберты 1997

Количество ингредиентов Выход: 4 порции

• * 450 г 1 фунт Зубр внутри круглый

Маринад

• 90 мл 3 унции.Сухой херес
• 15 мл 1 ст. Свежий розмарин
• 15 мл 1 ст. Чеснок свежий
• 15 мл 1 ст. Чабрец свежий
• 15 мл 1 ст. Орегано свежий
• 5 мл 1 ч. Перец молотый
• 250 мл 1 чашка оливкового масла

Повязка

• 4 зубчика Свежий чеснок
• 130 мл ½ стакана оливкового масла
• 130 мл ½ стакана бальзамического уксуса
• 5 мл 1 ч.Дижонская горчица
• Соль и перец

Приправы

• 150 мл 2/3 стакана фасоли пинто (предварительное замачивание)
• 1 Помидор, мед. нарезанный кубиками
• 15 мл 1 ст. Кинза, нарезанная
• 15 мл 1 ст. Петрушка, нарезанная
• 20 мл 4 ч. Уксус яблочный
• 60 мл ¼ чашки Лук, мелкие кубики 15 мл 1 ст. Сахар
• 5 мл 1 ч. Треснутый перец
• 5 мл 1 ч. Соль
• 4 порции Дикая зелень

Метод приготовления

1. Приготовьте маринад и добавьте зубра.Поставить в холодильник на ночь (24 часа).
2. Выньте зубра из маринада и обжарьте на очень горячей сковороде.
3. Поместите в духовку при 300 ° F и запекайте до желаемой степени готовности.
4. Охладите перед нарезкой.
5. Сварить фасоль пинто в 600 мл холодной подсоленной воды до готовности.
6. Слейте воду и промойте под холодной водой.
7. Смешайте оставшиеся ингредиенты для приправы.
8. Добавить к фасоли и мариновать 2 часа.
9. При необходимости отрегулируйте заправку.
10. Приготовьте заправку, смешав все ингредиенты и взбивая.
11. Разложите зелень по тарелкам. Тонко нарезать зубра по диагонали и выложить веером рядом с зеленью. Полить соусом зубра и зелень. Разложите фасоль поровну по тарелкам и подавайте. Украсить соответствующим образом.

Судя по цифрам, игроки European Ryder Cup наслаждаются своим положением в истории.

KOHLER, WIS. — Когда Ли Вествуд появился в Испании, чтобы принять участие в своем первом Кубке Райдера в 1997 году в Вальдерраме, не требовалось обучения, чтобы понять, что он вот-вот примет участие в одном из крупнейших спортивных событий в мире.

Вествуд точно понял, во что он войдет, когда был еще подростком. Первое мероприятие по гольфу, которое когда-либо посетил Вествуд — первое — был Кубок Райдера 1989 года на Белфри, недалеко от его дома в Англии.

«На самом деле, лучшее чувство профессионального гольфа, которое я когда-либо испытывал, было, когда я смотрел, как Сев Бальестерос, Ян Вуснам, Ник Фалдо и Бернхард Лангер играют в The Belfry на Кубке Райдера», — сказал Вествуд, который на этой неделе будет участвовать в соревнованиях. в этом турнире в 11-й раз, в результате чего Фалдо стал равным по количеству матчей среди европейской сборной.

«Когда я начал играть в него в 1997 году, я почувствовал, что это вершина командного спорта, и я думаю, ничто не сравнится с Кубком Райдера. Очень сложно создавать команды для Кубка Райдера, и это становится особенным, когда ты попадаешь в команду и представляешь Европу ».

КОЛЕР, ВИСКОНСИН — 22 сентября: Ли Вествуд из Англии и команда Европы реагируют после того, как Пол Кейси из Англии и команда Европы вылезли из бункера на 15-й лунке во время тренировочного раунда перед 43-м Кубком Райдера в Whistling Straits 22 сентября 2021 года. в Колере, штат Висконсин.(Фото Уоррена Литтла / Getty Images)

Фото: Уоррен Литтл / Getty Images

игрока из шести стран соберутся на этой неделе, чтобы сыграть под флагом Европы. С тех пор, как в 1979 году команда Великобритании и Ирландии расширилась за счет игроков со всей континентальной Европы, Европа держала преимущество 11-8-1 в турнире, в котором многие годы доминировали американцы. (У сборной США рекордный результат 26–14, но Европа выиграла девять из последних 12.)

Только по мировым рейтингам U.На этой неделе S. Team будет непомерным фаворитом. Девять из 11 лучших игроков мира — красные, белые и синие; В Европе есть один игрок среди 11 лучших, это №1 в мире Йон Рам из Испании. Это не новое повествование. В последнее время Европа довольно часто превращала роль «аутсайдера» в воскресные праздники, выиграв четыре из последних пяти Кубков Райдера. Ян Поултер называет это «секретным соусом», стремлением Европы постоянно делать свою команду более сильной, чем, по-видимому,
суммой ее частей.

«Многие ребята в моей команде, многие европейцы, похоже, хотят быть командными игроками», — сказал капитан Европейского Кубка Райдера Падрейг Харрингтон, игравший в шести Кубках Райдера. «Шейн Лоури думал, что станет гэльским футболистом; Серхио (Гарсия) думал, что собирается стать футболистом. Так что у многих из них есть командный опыт, который они жаждут больше, чем гольф. Это их возможность ».

С этой целью Харрингтон и официальные лица European Tour придумали интересный способ поприветствовать 12 игроков команды на этой неделе на Whistling Straits.Каждому игроку был присвоен номер, показывающий его хронологический статус в создании команды, которую в истории составили всего 164 игрока. Вествуд — № 118; Гарсия, играющий в своем 10-м Кубке Райдера, занимает 120-е место. Бернд Висбергер, один из трех новичков, подавших свои номера в алфавитном порядке, занимает 164-е место.

«Все в восторге, — сказал Висбергер. «У нас есть индивидуальный аспект в этой игре, но на этой неделе мы все собрались как 12. У каждого есть свой номер, и никто не может его отнять.«
Europe имеет ряд славы в своей командной комнате, демонстрируя ключевые фигуры из истории Кубка Райдера, а в понедельник вечером Харрингтон показал вдохновляющее видео, показывающее лучших игроков в истории, которое еще раз подтвердило, какое особое достижение — просто создать команду. Номера игроков указаны на передней части сумок для гольфа и на головных уборах. Даже напитки в баре названы в честь бывших игроков Ryder Cup.

Послание Харрингтона 12 игрокам этого года: если вы здесь, то вы особенный.Сделайте это.

Первый Кубок Райдера был разыгран в 1927 году. Обри Бумер, первый по алфавиту в команде Великобритании и Ирландии 27-го года и участник первого тандема, заработавшего очко для GB&I, числится под номером 1. Эйб Митчелл, Игрок / учитель из Англии, чья скульптура находится на вершине 17-дюймового трофея Ryder Cup, занимает 9 место (он вошел в первую команду, но не ездил за границу из-за аппендицита).

Сэр Генри Коттон — номер 12. Кристи О’Коннор-старший, сыгравшая за 10 команд Ryder Cup, занимает первое место.47. Ник Фалдо — 84-е место, а Севе Баллестерос, испанец, обстрелявший европейцев, — 86-е место. Харрингтон сообщил своим игрокам, что относительно небольшое количество игроков, которые представляли Европу почти столетие, что 580 человек полетели в космос и 5870 поднялись на Эверест.

«Для игроков очень важно знать, что у них есть место в истории, которое невозможно отнять у них», — сказал Харрингтон. «У них всегда будет имя на этой стене.

Харрингтон назвала вдохновляющее видео, показанное команде, «прекрасным способом начать неделю
».

Вествуд, Гарсия, Рори Макилрой и Ян Поултер видели, как многие капитаны пробовали разные методы, чтобы поджечь своих игроков на Кубках Райдера. Видео в понедельник вечером произвело на каждого из них эмоциональное впечатление. Поултер играл в шести командах Кубка Райдера и лишь однажды был проигравшей стороной. Когда Европа уступила в Медине в 2012 году со счетом 10: 4 в какой-то момент, он был решительным человеком, который почти в одиночку дал своей команде малейшую надежду, завершив свой субботний дневной четырехболовый матч пятью
птичками подряд, чтобы заработать. точка рядом с Макилроем.

Поултер знает, что, как бы сладко ни было выиграть любой кубок Райдера, вкус может быть еще слаще, когда победа приходит на иностранный газон. Эта американская сторона сложена стопкой. Сохранить Кубок Райдера на этой неделе будет сложной задачей.

«Достаточно посмотреть вокруг, а все трибуны красные (цвет Америки)», — сказал Поултер в среду на Whistling Straits. «Все, на что вы смотрите, фанаты, 98 процентов, очевидно, будут фанатами из США на этой неделе. Это сложно от начала до конца.Это тяжело. Вдали от дома играть непросто.

«Насколько мы чувствуем себя комфортно в команде, зная, что мы проигравшие, мы знаем, что на этой неделе мы должны сыграть особую роль, чтобы выполнить свою работу».

КОЛЕР, ВИСКОНСИН — 22 сентября: Ян Поултер из Англии и сборная Европы шутят с Полом Кейси из Англии и сборной Европы во время тренировочного раунда перед 43-м Кубком Райдера в Whistling Straits 22 сентября 2021 года в Колере, Висконсин. (Фото Уоррена Литтла / Getty Images)

Фото: Уоррен Литтл / Getty Images

Поултер — один из шести англичан в команде Кубка Райдера этого года, но он предпочел бы считать себя одним из 12.Все европейцы. Все объединяются ради общего дела.

«Мы играем друг для друга. Я думаю, что это лучшее, что вы можете сделать », — сказал Макилрой, играющий в своем шестом Кубке Райдера, о представлении сборной Европы. (Он игрок № 144 Ryder Cup.)

«Вы играете за ребят, которые находятся рядом с вами. Вы играете за всех, кто помогает нашей команде побеждать на этой неделе. Вы, очевидно, играете за свою страну и свой континент, и я думаю, что в некотором роде ваш тур тоже. Но больше всего мы играем друг за друга.”

На протяжении почти трех десятилетий европейская команда Кубка Райдера была одной из
историй успеха в спорте. Это пресловутый «Маленький паровозик» мог. Игрок
, который через два года станет игроком № 165 в Италии? Он будет считать себя
счастливчиками. Он навсегда останется частью чего-то действительно особенного.

3 способа насладиться важными моментами

Год назад, направляясь на Суперкубок LIV, защитник Зала славы Бретт Фавр настоял на том, чтобы послать сообщение защитнику Канзас-Сити Патрику Махоумсу.

Ни о планах вождей, ни даже о защитниках жителей Сан-Франциско.

Всего два слова, не имеющих отношения к игре.

«Развлекайтесь», — сказал Фавр, сообщает TMZ Sports. «Впитайте это!»

Возможно, Фавр говорит по собственному опыту.

Сейчас 51, Фавр впервые сыграл в Суперкубке в четвертом сезоне в качестве стартера, сыграв ключевую роль в победе команды Green Bay Packers в Суперкубке XXXI. Широко рассматриваемые как потенциальная династия, учитывая замечательный состав игроков и тренеров, «Пакерс» были фаворитами, чтобы повторить чемпионство в сезоне 1997 года, но были расстроены «Денвером Бронкос» — 31–24.

Фавр никогда не играл ни в одном Суперкубке.

Махоумсу 25 лет, и он уже стал лучшим игроком Суперкубка и НФЛ, борясь за свой второй титул подряд.

Судя по его социальным сетям, Магомес определенно не считает ранний успех в своей карьере само собой разумеющимся.

Но есть и многие другие.

Вот три способа получить удовольствие от важных моментов.

Практика благодарности

Да, благодарность подобна мускулу. Чем больше вы над этим работаете, тем сильнее он становится.Кроме того, исследования подтверждают преимущества практики благодарности и влияние, которое может оказать на ваше психическое, эмоциональное и даже физическое здоровье.

Благодарный спортсмен не ведет себя так, как будто он «заслуживает» чего-либо, будь то награда или признание. Нет никакого чувства права. Благодарный спортсмен также старается изо всех сил показать другим, что они ценят их усилия и роль.

Магомес всегда проявлял благодарность. Он был благодарен за наставничество Алексу Смиту, который был стартовым игроком в его сезоне новичка.Он был благодарен Тому Брэди за его поиски и поддержку после победы над Магомсом в его первом постсезонке два года назад. И он выразил благодарность своему тренеру Энди Рейду, разным товарищам по команде и после помолвки.

На Рождество Магомес подарил своим наступательным линейным игрокам часы и чемоданы тренеров, набитые одеждой и солнцезащитными очками.

«Я имею в виду, что вы должны позаботиться об этих парнях заранее», — сказал Махоумс KCSP 610 Sports Radio. «Я имею в виду, что они заботятся о тебе каждый божий день.«

Что касается тренеров, Махоумс сказал: «Эти парни проводят всю свою жизнь на тренировках, готовясь поставить нас в лучшую возможную ситуацию, так что вы тоже хотите позаботиться об этих парнях».

Начните с малого

Прежде чем человек сможет по-настоящему ценить важные моменты, он должен научиться наслаждаться маленькими.

К сожалению, COVID-19 заставил многих пересмотреть приоритеты и простые удовольствия. Конечно, очень легко пропустить большие загородные турниры. Но многие спортсмены упускают возможность просто потренироваться лично, с товарищами по команде и тренерами.Есть большие преимущества в настройке, общении и практике с помощью Zoom. Но упускаются и те моменты, когда мы идем плечом к плечу.

Так что научитесь ценить мелкие моменты, такие как короткие разговоры, надевая тренировочное снаряжение, или дополнительные тренировки на упражнении или упражнении. Перед тренировкой или игрой подумайте и оцените свое здоровье, свою команду, судей и даже соперника.

Все эти вещи — большие и маленькие — дают вам возможность тренироваться и / или соревноваться.

Джаром Игинла провел большую часть своей карьеры в Зале славы за «Калгари Флэймз» и привел их в финал Кубка Стэнли 2004 года. Он возглавил свою команду с тремя голами в финале, но Flames проиграли 7-ю игру со счетом 2: 1.

Это был его единственный матч в Кубке Стэнли за 21 сезон НХЛ.

Но Игинла был признателен за многие другие моменты своей карьеры, в том числе за более 600 голов и помощь Канаде в завоевании двух олимпийских золотых медалей.

«Я бы хотел, чтобы мы добились большего успеха за последние несколько лет, — сказал Игинла после того, как Flames обменяли его в апреле 2013 года, — но я счастлив, что мы попробовали.«

Будьте в данный момент

До COVID, сколько раз вы заходили в ресторан и видели людей, сидящих вместе за одним столом, все на своих мобильных телефонах? То же самое происходит в спорте, когда команда выигрывает игру, а ее игроки берут свои мобильные телефоны и «выходят в эфир» или постоянно снимают фотографии и видео для социальных сетей.

Многозадачность стала популярной, и люди постоянно раздвигают границы того, что они могут сделать за один раз. Но факт в том, что вы не полностью в данный момент, если снимаете непрерывные фотографии и видео.Присутствовать — значит быть внимательным, а это значит, что вы вовлечены в то, что происходит вокруг вас. С телефоном в руке вы смотрите сквозь его линзу. Но когда вы внимательны, все ваши чувства работают, и вы можете приспособиться к тому, что вы видите, слышите, обоняете и даже чувствуете.

Иногда самые запоминающиеся вещи несовершенны, менее очевидны.

Это не означает отказ от фото- или видеосъемки, а скорее сосредоточение внимания на том, чтобы жить настоящим моментом, а не улавливать момент. Если возможно, попросите друга, обладающего некоторыми фотографическими навыками, сопровождать вас.Однако на более высоких уровнях команды нанимают фотографов и видеооператоров, поэтому доверьте им свою работу.

В противном случае быстро определите несколько моментов, которые вы хотите запечатлеть, а затем держите телефон в кармане все остальное время.

Но не ставьте картинку выше впечатлений.

Баклажан Гранатовый вкус

Мы адаптировали этот рецепт из поваренной книги «Лицензия на гриль» Криса Шлезингера и Джона Уиллоуби 1997 года (Morrow, 1997).Подавайте это острое блюдо с рыбой или дичью.

Приправы из баклажана и граната

Этот вкус является интригующим дополнением к рыбе или дичи.

Урожайность: около 3 чашек

Состав

• ¹ ⁄ ₃ стаканов оливкового масла первого холодного отжима
• 1 большой баклажан, нарезанный кубиками
• 1 красная луковица, очищенная и нарезанная
• 6 зубчиков чеснока, очищенных и измельченных
• 1 (2 «) кусок имбиря, очищенного и измельченного
• 1 стакан томатного сока
• ¹ ⁄ ₃ чашка гранатовой патоки
• 1 ч. Л.кайенский перец
• Соль и свежемолотый черный перец
• ¹ ⁄ ₂ стаканов нарезанных свежих листьев мяты
• 1 небольшой гранат без семян (по желанию)

Инструкции

1. Нагрейте масло в большой сковороде на сильном огне до горячего состояния. Добавьте баклажаны и готовьте, часто помешивая, до мягкости 5–10 минут.
2. Уменьшите огонь до среднего, добавьте лук и готовьте, часто помешивая, до легкого размягчения, 2–3 минуты.Добавьте чеснок и имбирь и готовьте до появления аромата 1 минуту.
3. Добавьте томатный сок, гранатовую патоку и кайенский перец и приправьте по вкусу солью и перцем. Перемешайте, чтобы ослабить коричневые кусочки на дне сковороды. Доведите смесь до кипения, убавьте огонь до минимума и тушите, часто помешивая, до загустения около 5 минут. Снимите с огня и добавьте мяту и, если используете, семена граната. Отрегулируйте приправы.

Онголе: Наслаждайтесь вкусом математики, естествознания на среднем уровне с наставником с двадцатилетним стажем работы

Кадхиресан — Онголе: Наслаждайтесь вкусом математики, естественных наук на среднем уровне с наставником с двумя десятилетиями работы Это объявление в настоящее время приостановлено и не может быть просмотрено пользователями сайта!

• Почасовая ставка $ 13
• Время отклика 24ч

К сожалению, этот репетитор недоступен

Об уроке

Осуществлять обучение на основе действий с практическим применением по теме.Вынесите концепции за пределы классной комнаты, чтобы сделать обучение увлекательным и охватить все слои учащихся. Избегайте механического запоминания и в основном играйте ключевую роль на среднем уровне

предметов

• Математика
• Алгебра
• Физика
• +3

  Тригонометрия

  Химия

  Арифметика

уровней

• Начальная школа
• Средняя школа
• Второкурсник
• +5

  Младший

  Старший

  Обучение взрослых

  Мастера

  Докторантура

О Кадиресане

Я директор ведущей международной школы в прибрежном районе Андхра-Прадеш.Был с CBSE, ICSE и различными государственными учебными программами вместе с коротким пребыванием на Ближнем Востоке. Мои ученики тоже добились успеха в своей карьере и жизни.

Другие репетиторы по математике

• Методы и приемы обучения будут реализованы с учетом уровня компетентности учащегося. Современный …

• Мне нравится рассматривать преподавание как учебный опыт: пусть студенты сначала показывают мне то, что они знают, а затем учат на основе этого….

• В общем, мне нравится сначала тестировать студентов, чтобы получить хорошее представление о том, где они борются, а затем разбивать …

• Я основываю свои классы на анализе словесных задач, а также на овладении навыками, отвечая на листы заданий. Объясняю …

• Сосредоточьтесь на учениках. Мне нравится, когда в классе больше беседы с упором на их слабые стороны, чем лекции …

• Я использовал разные методы обучения, в зависимости от способности ученика к обучению.Я использовал обучение реальной жизненной ситуации …

• Руки вперед! Насколько это возможно. Трудно выучить что-либо, математику или музыку, не работая над задачами и не играя аккордов …

• Мой метод обучения включает в себя краткое изложение урока, а затем пошаговое углубленное изучение темы. Я пытаюсь …

• Я подхожу к каждой теме на основе ощущения комнаты или ученика, определяю стиль обучения ребенка или детей с помощью …

• В качестве основной стратегии обучения при подходе, ориентированном на учителя, прямое обучение использует пассивное обучение или …

• Изучение принципов важно, но вы максимально эффективно используете свое время, работая над проектами или участвуя в …

• Мой метод обучения в основном заключается в том, чтобы задавать вопросы и анализировать темы. Я очень дружелюбен и найду время, чтобы сделать …

• Мой опыт работы в академических и промышленных кругах позволяет мне видеть как теоретический, так и практический подход к проблемам.Я ученый …

• Мой подход к обучению — учиться на практике. Я обычно преподаю одну или две концепции и даю много практических задач, чтобы помочь …

• Я сертифицирован по онлайн и гибридным методам обучения. Я призываю студентов расти, делясь моими 40-летними …

• Мой метод обучения основывается на основных принципах изучаемого предмета. Студент всему научится …

• Моя педагогическая идеология основана на обучении студентов решать проблемы, используя свои ресурсы.Я считаю, что когда вы учите …

• Я студент и люблю обучать молодых людей. Я помогаю студенту с домашним заданием и отвечаю на его вопросы. Если я увижу это …

• Вы можете почувствовать перегрузку. Давайте делать это шаг за шагом. Давайте посмотрим, где вам нужно больше всего практики и поработать над своим …

Пожаловаться на эту публикацию

Опишите проблему, возникшую в этом объявлении

Контактные данныеЗаконный, мошеннический или ненадлежащий контентДубликатНеверная категорияТекст невозможно понять Другое

Отправить .